Caveolin-1單倍不足對人乳腺上皮細(xì)胞周期蛋白調(diào)控的影響.pdf

1、乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤，嚴(yán)重威脅著女性的健康。全世界每年約有一百多萬婦女患有乳腺癌。乳腺癌的發(fā)生是一個多階段、多因素參與的過程。據(jù)目前的研究，這一過程包括某些抑癌基因的失活，如 p53、Rb、p16、BRAC1、BRAC2和PETN等，也包括某些受體蛋白的異常表達(dá)，如雌激素受體(ER)等。這些參與細(xì)胞轉(zhuǎn)化或癌變過程的因子在不同的階段可與不同的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路作用。但到目前為止，與乳腺上皮細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化有關(guān)的分子機(jī)制仍不清楚，導(dǎo)致乳腺癌發(fā)病

2、機(jī)理的研究難以取得突破性進(jìn)展，因此確定抑癌基因在乳腺癌發(fā)生中的作用至關(guān)重要。近來研究發(fā)現(xiàn)，CaVeolin-1 與乳腺上皮細(xì)胞早期轉(zhuǎn)化和腫瘤形成有密切關(guān)系，深入的研究有望揭示這一機(jī)制。 在我們前期的實驗中利用基因捕獲技術(shù)得到穩(wěn)定傳代的Cav-1單倍不足 (haploinsufficiency) 乳腺細(xì)胞株 (MCF1 0A-ST1，MCF10A-ST3)，Cav-1 的 mRNA 和蛋白質(zhì)表達(dá)均明顯降低，并且也已經(jīng)證實 Cav-

3、1 的單倍不足足以誘導(dǎo)人乳腺上皮細(xì)胞發(fā)生部分轉(zhuǎn)化。但是，其細(xì)胞機(jī)制尚不完全清楚。 乳腺癌細(xì)胞的生長受多種因素調(diào)控，如細(xì)胞周期失調(diào)，細(xì)胞增殖過度以及內(nèi)分泌失衡等。近來的研究表明，Cyclin D1過表達(dá)是乳腺癌細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的重要事件。在乳腺癌發(fā)生過程中，Cyclin D1的聚集持續(xù)存在于乳腺癌進(jìn)展的各個方面階段，它作為細(xì)胞周期調(diào)節(jié)因子之一，在乳腺癌發(fā)生過程中起著關(guān)鍵性作用。 本實驗以正常人乳腺上皮細(xì)胞株 (MCF10A)、

4、Cav-1 單倍不足乳腺上皮細(xì)胞株 (MCF10A-ST1，MCF10A-ST3) 以及乳腺癌細(xì)胞系(MCF7)為研究對象，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期時相， Westernblot 方法檢測了細(xì)胞周期相關(guān)蛋白及轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)以及 RT-PCR的方法觀察 Cyclin D1 mRNA水平的變化，探討了 Caveolin-1的表達(dá)水平與乳腺細(xì)胞周期調(diào)控的關(guān)系及其可能的分子機(jī)制。闡明Caveolin-1 在人正常乳腺細(xì)胞早期轉(zhuǎn)化中的部分作用機(jī)

5、制，為進(jìn)一步揭示乳腺癌發(fā)病機(jī)理提供直接的科學(xué)依據(jù)。 結(jié)果如下：(1) CaV-1 在單倍不足細(xì)胞株 MCF10A-ST3 和MCF10A-ST1 的表達(dá)分別為 MCF10A 的 50％和 30％，而在乳腺癌細(xì)胞系 MCF7 中幾乎沒有檢測到 Cav-1 的表達(dá)；(2) Cav-1 單倍不足細(xì)胞時相發(fā)生改變，MCF10A-ST3 細(xì)胞株 G1 期和 S 期細(xì)胞數(shù)分別為35.4％和 56.4％；(3) Cav-1 單倍不足乳腺細(xì)胞株

6、中，隨著 Cav-1的下調(diào)，Cyclin D1 的蛋白和 mRNA 水平均增加，P21 的表達(dá)下調(diào)，而 P16 的表達(dá)水平?jīng)]有受到影響：(4) Cav-1 單倍不足可以激活c-Jun、 ER-α的表達(dá)，從而促進(jìn)細(xì)胞增殖，腫瘤發(fā)生；Cav-1 單倍不足細(xì)胞株中沒有檢測到 c-Fos 的表達(dá)，但在MCF7細(xì)胞系中的表達(dá)呈陽性；轉(zhuǎn)錄因子 AP-1 在 MCF10A，MCF10A-ST1，MCF10A-ST3的表達(dá)幾乎一致，MCF7則高于前三種