β1族整合蛋白過表達(dá)對(duì)人肝癌細(xì)胞細(xì)胞周期的調(diào)控及其機(jī)制研究.pdf

1、整合蛋白(integrins)是一類重要的細(xì)胞表面粘附分子,可以調(diào)節(jié)許多基本的細(xì)胞功能,例如細(xì)胞增殖、分化和凋亡等過程.一般來說,整合蛋白通過控制細(xì)胞—細(xì)胞外基質(zhì)粘附結(jié)構(gòu)的組裝與生長(zhǎng),進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞增殖或抑制細(xì)胞凋亡.但是在一些實(shí)體腫瘤中,例如肝癌細(xì)胞,整合蛋白表達(dá)水平通常較低.而且越來越多的實(shí)驗(yàn)證據(jù)顯示,整合蛋白可能參與細(xì)胞周期的抑制性調(diào)節(jié).因此,我們擬從此方面著手以探討整合蛋白對(duì)細(xì)胞周期抑制性調(diào)控的作用及分子機(jī)制.首先,在肝癌細(xì)胞SM

2、MC-7721中建立整合蛋白α5和/或β1亞基基因穩(wěn)定表達(dá)株,觀察β1族整合蛋白過表達(dá)對(duì)細(xì)胞周期的影響.實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),在β1族整合蛋白過表達(dá)細(xì)胞株β1-7721和α5β1-7721中,發(fā)現(xiàn)S期阻滯現(xiàn)象.隨后,我們進(jìn)一步探討了這種細(xì)胞周期阻滯的分子機(jī)制.結(jié)果顯示,在β1-7721和α5β1-7721細(xì)胞中細(xì)胞周期素D1(cyclin D1)和CDK2的蛋白含量沒有明顯變化,而細(xì)胞周期抑制性調(diào)控因子p27<'KIP1>和p21<'CIP>蛋白表

3、達(dá)水平明顯增高.同時(shí),在α5β1-7721和β1-7721細(xì)胞中,FAK的蛋白含量及其磷酸化水平均無明顯變化;PKB蛋白含量雖無變化,但其磷酸化程度卻降低.β1族整合蛋白過表達(dá)并不影響p27的mRNA水平.當(dāng)應(yīng)用wortmannin抑制PI3K活性以使PKB磷酸化水平降低時(shí),p27蛋白表達(dá)呈上調(diào)趨勢(shì);當(dāng)在細(xì)胞粘附存在下PKB磷酸化增加時(shí),p27蛋白水平卻下降.由此,我們推測(cè),在β1族整合蛋白過表達(dá)引起S期阻滯的過程中,PKB活性變化起了