精漿中IL-17水平與精液質(zhì)量關(guān)系的研究.pdf

1、細(xì)胞因子(Cytokine)是指由活細(xì)胞分泌,具有生物活性的多肽或蛋白質(zhì)產(chǎn)物,對睪丸諸多方面的功能有一定影響,尤其在精子發(fā)生、發(fā)育、成熟、獲能和受精能力等方面均有很重要的作用。白細(xì)胞介素(IL)-17也稱為細(xì)胞毒性T細(xì)胞抗原8(cytotoxic T lymphocyte associated antigen8,CTLA8),可以誘導(dǎo)基質(zhì)細(xì)胞分泌IL-6、IL-8,并能促進(jìn)巨噬細(xì)胞釋放IL-1β、IL-6、IL-10、IL-12及TNF

2、-α。有研究顯示,精漿中的細(xì)胞因子包括白細(xì)胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12及腫瘤壞死因子(TNF)-α等水平對精液的密度、活力等精液參數(shù)有影響。另外,IL-17水平變化與早期內(nèi)異癥及內(nèi)異癥不孕的發(fā)病有關(guān)。至今,國內(nèi)外未見有關(guān)IL-17與精液質(zhì)量關(guān)系的文獻(xiàn)報(bào)道。為探討白細(xì)胞介素(IL)-17在男性不育中所起的作用,我們對浙江省計(jì)劃生育科學(xué)技術(shù)研究所的供精志愿者及部分男性不育癥病人精漿中IL-17水平進(jìn)行了檢

3、測,現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。
　　1、材料與方法
　　1.1標(biāo)本來源1.1.1供精志愿者:2007年5-6月至浙江省人類精子庫進(jìn)行首次精液篩查的供精志愿者,共45例,年齡20-25周歲,平均(21.8±1.1)周歲,全部為在校學(xué)生,未婚,其中10例供精志愿者有性伴侶。1.1.2男性不育癥病人:2007年5～6月至浙江省計(jì)劃生育?？崎T診部就診的男性不育癥病人(精子密度或活力兩次未達(dá)到WHO正常人參考值),共12例,年齡26～38周歲

4、,平均(30.1±3.6)周歲,均已婚。所有研究對象外生殖器檢查均無異常;雙側(cè)睪丸均不小于12ml;血清性激素FSH、LH、T檢測正常;尿常規(guī)檢查白細(xì)胞陰性。
　　1.2方法
　　1.2.1精液標(biāo)本收集:囑供精者取精前禁欲3-5天,先排尿,將陰莖、龜頭及雙手用0.1％的新潔爾滅消毒,以手淫法采集精液于無菌燒杯內(nèi),置37℃水浴箱內(nèi)液化。
　　1.2.2精液常規(guī)分析:待精液完全液化后,按《WHO人類精液及精子-宮頸粘液相互

5、作實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)手冊》(1999)進(jìn)行精液分析,內(nèi)容包括精液量、PH值、液化時(shí)間、外觀、精子密度、精子活力、活動率等指標(biāo)。留取0.5ml精液分別在精液取出后4小時(shí)、8小時(shí)、24小時(shí)進(jìn)行精子存活率分析。
　　1.2.3精子形態(tài)染色及分析:待精液液化后,將精液滴于潔凈玻片上,推成薄片,自然干燥后,改良巴氏染色,樹膠封固。精子形態(tài)分析按《WHO人類精液及精子-宮頸粘液相互作實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)手冊》(1999)進(jìn)行。油鏡下觀察,計(jì)數(shù)至少200個精子以

6、上,按標(biāo)準(zhǔn)對精子形態(tài)進(jìn)行分類,并分別記錄其結(jié)果。包括正常精子百分率、頭部異常百分率:頸部及中段異常百分率、尾部異常百分率、胞漿小滴百分率。
　　1.2.4精液細(xì)菌菌落計(jì)數(shù):吸取液化的精液標(biāo)本,分別用滅菌的蒸餾水按1:10、1:100、1:1000稀釋至1000μl,將稀釋好的精液依次加到培養(yǎng)皿內(nèi),然后將已預(yù)熱至56℃10%的羊血與瓊脂混合液分別加到培養(yǎng)皿中,并與精液充分混勻,置37℃,培養(yǎng)48小時(shí),計(jì)算菌落數(shù)。
　　1.2.

7、5精漿中IL-17、IL-6、IL-8及TNF-α水平測定:精液完全液化后取部分精液以600 g/min離心的20 min,分離精漿保存于-20℃,待行各種細(xì)胞因子的檢測。采用上海博光生物科技有限公司進(jìn)口分裝試劑盒,應(yīng)用ELISA夾心法測定精漿中IL-17、IL-6、IL-8及TNF-α含量。
　　1.2.6血清T、FSH、LH測定:所用儀器為德國拜耳(Bayer)公司ACS:18O SE全自動化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)(Automated

8、 chemiluminescence system),其靈敏度可達(dá)10-12g/L;所用試劑均為隨機(jī)配套試劑。1.2.7統(tǒng)計(jì)學(xué)分析所有數(shù)據(jù)以mean±SD表示,組與組均值之間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),相關(guān)分析采用線性回歸法。采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析。2.結(jié)果2.1精漿中可檢測出IL-17,最低為0.45 pg/ml,最高為16.67 pg/ml,平均為4.39±3.20pg/ml。
　　2.2 IL-17與精液參數(shù)的關(guān)

9、系。
　　精液分析結(jié)果按前向運(yùn)動精子(a級+b級)百分率分為低活力組(a級+b級<50%)和高活力組(a級+b級≧50%),低活力組IL-17濃度(6.00±3.97 pg/ml)明顯高于高活力組(3.37±2.09pg/ml),有顯著性差異(P<0.01);按精子密度<60×106/ml及≧60×106/ml分組,兩組IL-17濃度無顯著性差異(P>0.05);按正常形態(tài)精子百分率<30%及≧30%分組,兩組IL-17濃度無顯著

10、性差異(P>0.05);按PH值<7.5及≧7.5分組,兩組IL-17濃度無顯著性差異(P>0.05)。2.3精漿中IL-17水平與精子4h、8h、24h內(nèi)死亡率的關(guān)系。IL-17低濃度組精子4h、8h、24h內(nèi)死亡率均明顯低于IL-17高濃度組(P<0.05)。2.4精液細(xì)菌菌落計(jì)數(shù)與精漿中IL-17濃度的關(guān)系。細(xì)菌菌落計(jì)數(shù)結(jié)果按<104CFU/ml及≧104 CFU/ml分組,兩組IL-17濃度無顯著性差異(P>0.05),2.5精

11、漿中IL-17水平與精漿中IL-6、IL-8及TNF-α水平的關(guān)系。IL-17低濃度組的IL-6濃度(15.71±9.19pg/ml)明顯低于IL-17高濃度組(45.47±16.52pg/ml),有顯著性差異(P<0.01),P<0.01;IL-17低濃度組的IL-8濃度(374.4±216.2pg/ml)明顯低于IL-17高濃度組(1214.2±1073.8pg/ml),有顯著性差異(P<0.01);兩組TNF-α水平無顯著性差異(

12、P>0.05)。經(jīng)相關(guān)性分析,精漿IL-17與IL-6、IL-8、TNF-α均呈正相關(guān),IL-17與IL-6的相關(guān)系數(shù)r=0.801(P<0.01);IL-17與IL-8的相關(guān)系數(shù)r=0.579,(P<0.01);IL-17與TNF-α的相關(guān)系數(shù)r=0.361(P<0.01)。2.6精漿中IL-17濃度與血漿中FSH、LH、T濃度的關(guān)系。按IL-17的濃度分組,兩組血清中FSH、LH、T水平均無顯著性差異(P>0.05)。
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