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1、目的:本實(shí)驗(yàn)以國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(編號(hào):81072838)為依托進(jìn)行設(shè)計(jì)。在中醫(yī)學(xué)“情志學(xué)說(shuō)”理論基礎(chǔ)上,結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)“心理應(yīng)激”理論,以體外培養(yǎng)的人子宮肌瘤平滑肌細(xì)胞(簡(jiǎn)稱ULM細(xì)胞)為研究對(duì)象,探討“肝郁-心理應(yīng)激”通過(guò)腎上腺素能受體(Adrenergic Receptor,AR)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,上調(diào)VEGF、FGF表達(dá)的作用機(jī)制,為臨床從“肝郁-心理應(yīng)激”角度防治子宮肌瘤(Uterine leiomyomas,ULM)提供新的
2、思路及方法,并為中醫(yī)學(xué)“情志學(xué)說(shuō)”提供新的理論依據(jù)。
方法:采用膠原酶消化法對(duì)UL M細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng),經(jīng)H E及免疫組化染色法進(jìn)行細(xì)胞學(xué)鑒定。將培養(yǎng)的ULM細(xì)胞分為4組:Α.空白組;B.去甲腎上腺素(Norepinephrine, NE)組;C.腎上腺素(Epinephrine,E)組;D.異丙腎上腺素(Isoproterenol,ISO)組。除Α組外,B組于培養(yǎng)液中添加NE:0.1μmol/l、1μmol/l、10μmol
3、/l;C組于培養(yǎng)液中添加E:0.1μmo l/l、1μmo l/l、10μmo l/l;D組于培養(yǎng)液中添加ISO:0.1μmo l/l、1μmo l/l、10μmol/l。應(yīng)用競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA法)分別于以下四個(gè)時(shí)間點(diǎn):3h、6h、12h、24h檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(Vascular endothelial growth factor, VEGF)、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(Fibroblast growth fac
4、tor,F(xiàn)GF)的蛋白表達(dá)。
結(jié)果:
1.成功培養(yǎng)了原代ULM細(xì)胞,并經(jīng)HE染色及免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定證實(shí)。
2.各組ULM細(xì)胞培養(yǎng)液中VEGF蛋白表達(dá)的比較
①N E對(duì)U LM細(xì)胞VE GF蛋白表達(dá)的影響
不同劑量組和空白組多重分析,各劑量組VEGF蛋白表達(dá)平均測(cè)量值均高于空白組(P=0.000),1劑量組VEGF蛋白表達(dá)平均測(cè)量值最高,1劑量組和10劑量組VEGF蛋白表達(dá)平均測(cè)量值一致,
5、差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.074)。
不同測(cè)量時(shí)間點(diǎn)多重分析,各測(cè)量時(shí)間點(diǎn)的VEGF蛋白表達(dá)平均測(cè)量值不同(P=0.000),6小時(shí)的VEGF蛋白表達(dá)平均測(cè)量值最高、隨后呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。
②E對(duì)U LM細(xì)胞V EGF表達(dá)量影響
不同劑量組和空白組多重分析,各劑量組VE GF蛋白表達(dá)平均測(cè)量值均高于空白組(P=0.000),10劑量組VEGF蛋白表達(dá)平均測(cè)量值最高。
不同測(cè)量時(shí)間點(diǎn)多重分析,各測(cè)量時(shí)間
6、點(diǎn)的V EGF蛋白表達(dá)平均測(cè)量值不同(P=0.000),6小時(shí)的VEGF蛋白表達(dá)平均測(cè)量值最高、隨后呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。
?、跧SO對(duì)ULM細(xì)胞VEGF表達(dá)量影響
不同劑量組和空白組多重分析,1劑量組和10劑量組VEGF蛋白表達(dá)平均測(cè)量值低于空白組(P=0.000)。0.1劑量組VEGF蛋白表達(dá)平均測(cè)量值與空白組相比差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.167)。
不同測(cè)量時(shí)間點(diǎn)多重分析,VE GF蛋白表達(dá)平均測(cè)量值隨測(cè)量時(shí)間
7、的延長(zhǎng)呈下降趨勢(shì),除12小時(shí)和24小時(shí) VEGF蛋白表達(dá)平均測(cè)量值一致外(P=1.000),其他測(cè)量點(diǎn)VEGF蛋白表達(dá)平均測(cè)量值不同,差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
3.各組ULM細(xì)胞培養(yǎng)液中FGF蛋白表達(dá)的比較
?、貼E對(duì)ULM細(xì)胞FGF蛋白表達(dá)的影響
不同劑量組和空白組多重分析,1劑量組和10劑量組FGF蛋白表達(dá)平均測(cè)量值高于空白組(P=0.003,P=0.001)。其余各組間組FGF蛋白表達(dá)平均測(cè)
8、量值差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
不同測(cè)量時(shí)間點(diǎn)多重分析,6小時(shí)和12小時(shí)的FGF蛋白表達(dá)平均測(cè)量值分別高于3小時(shí)FGF蛋白表達(dá)平均測(cè)量值(P=0.015,P=0.003),其余測(cè)量時(shí)間點(diǎn)的FGF蛋白表達(dá)平均測(cè)量值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
?、贓對(duì)U LM細(xì)胞F GF蛋白表達(dá)的影響
不同劑量組和空白組多重分析,1劑量組和10劑量組FGF蛋白表達(dá)平均測(cè)量值高于空白組(P=0.020,P=0.00
9、0),0.1劑量組 FGF蛋白表達(dá)平均測(cè)量值與空白組一致,差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.322)。
不同測(cè)量時(shí)間點(diǎn)多重分析,6小時(shí)和12小時(shí)的FGF蛋白表達(dá)平均測(cè)量值分別高于3小時(shí)的FGF蛋白表達(dá)平均測(cè)量值(P=0.000,P=0.001),其余測(cè)量時(shí)間點(diǎn)的FGF蛋白表達(dá)平均測(cè)量值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
③ISO對(duì)ULM細(xì)胞F GF蛋白表達(dá)的影響
不同劑量組和空白組多重分析,各劑量組FGF蛋白表達(dá)平
10、均測(cè)量值均低于空白組FGF蛋白表達(dá)平均測(cè)量值(P=0.000)。
不同測(cè)量時(shí)間點(diǎn)多重分析,24小時(shí)的FGF蛋白表達(dá)平均測(cè)量值低于3小時(shí)和12小時(shí)的FGF蛋白表達(dá)平均測(cè)量值(P=0.005,P=0.042),其余測(cè)量時(shí)間點(diǎn)的FGF蛋白表達(dá)平均測(cè)量值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
結(jié)論:
1.腎上腺素能受體激動(dòng)劑NE、E可促進(jìn)ULM細(xì)胞VEGF、FGF的表達(dá)。
2.腎上腺素能受體激動(dòng)劑ISO可降低
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