續(xù)隨子種子化學(xué)成分的酪氨酸酶抑制性和抗氧化性研究.pdf

1、在《千金翼方》、《外臺秘要》、《普濟(jì)方》等中國古籍中均記載大戟科大戟屬植物續(xù)隨子(Euphorbia lathyris L.)的種子可以治療色斑、雀斑等色素沉積類疾病?，F(xiàn)代研究認(rèn)為皮膚產(chǎn)生過量的黑色素是引起黃褐斑、黑色素瘤等色素沉著性皮膚病的主要因素,而酪氨酸酶是黑色素生物合成過程的關(guān)鍵酶。本文以此為切入點,結(jié)合現(xiàn)代成分分析方法,通過酪氨酸酶抑制性實驗,分離篩選續(xù)隨子種子中具有潛在美白祛斑活性的物質(zhì),并對篩選得到的七葉內(nèi)酯的酪氨酸酶抑制

2、類型及其機理加以研究,同時對續(xù)隨子種子提取物的酪氨酸酶抑制性和抗氧化性進(jìn)行初步探討,為從續(xù)隨子種子中篩選出天然源的化妝品美白添加劑提供理論依據(jù)。具體內(nèi)容如下:
　　 1、采用酪氨酸酶抑制性實驗,測得種子醇提物的乙酸乙酯相、正丁醇相、水相和陽性對照熊果苷的半數(shù)抑制率(IC50)分別為:0.150 mg/mL、0.813 mg/mL、7.570mg/mL和1.600 mg/mL；利用高速逆流色譜(HSCCC)法,以氯仿-甲醇-水(v

3、/v/v,4/3/2)溶劑體系對種子醇提物的乙酸乙酯相進(jìn)行分離純化,通過酪氨酸酶抑制性實驗測得各產(chǎn)物均具有一定的酪氨酸酶抑制性；再采用高效液相色譜法對各產(chǎn)物純度進(jìn)行檢測、比較。結(jié)果表明:峰V純度高且成分單一,其純度達(dá)99.04％。采用質(zhì)譜、核磁共振氫譜并結(jié)合文獻(xiàn)報道對其進(jìn)行定性分析,最終鑒定為七葉內(nèi)酯。
　　 2、以L-酪氨酸和L-多巴為底物探究其抑制單酚酶、二酚酶的作用。結(jié)果表明:七葉內(nèi)酯對酪氨酸酶單酚酶活性的半數(shù)抑制率為0.

4、131 mg/mL,它以延長單酚酶作用的遲滯時間(0.3 mg/mL的七葉內(nèi)酯使得遲滯時間由91 s延長至385 s)和降低酶穩(wěn)定態(tài)活力的方式起到單酚酶抑制作用；七葉內(nèi)酯對酪氨酸酶二酚酶的半數(shù)抑制率為0.229 mg/mL。通過動力學(xué)方法分析出二酚酶的抑制作用表現(xiàn)為競爭性抑制類型,其抑制常數(shù)為0.398 mmol/L。
　　 3、以超氧陰離子自由基(O2-)、羥自由基(OH-)、1,1-二苯基-2-苦基肼自由基(DPPH)三種不

5、同自由基體系研究續(xù)隨子種子粗提物(乙酸乙酯相、正丁醇相)和七葉內(nèi)酯的活性清除作用,以IC50(清除率為50％時,抗氧化劑的濃度值)為評價指標(biāo)。結(jié)果表明:在實驗濃度范圍內(nèi),乙酸乙酯相、正丁醇相以及七葉內(nèi)酯清除超氧陰離子的IC50分別為:0.62 mg/mL、2.78 mg/mL、0.77 mg/mL,其清除作用均差于陽性對照Vc(0.48 mg/mL)。乙酸乙酯相、正丁醇相、七葉內(nèi)酯以及Vc對DPPH的IC50分別為:0.025 mg/m