HO-1對體外尿毒癥環(huán)境誘導HUVECs活化的保護作用.pdf

1、目的：研究誘導血紅素氧合酶-1（HO-1）高表達對尿毒癥環(huán)境介導的血管內(nèi)皮細胞損傷和活化的調(diào)節(jié)作用。 方法：隨機選取我院血液透析中心常規(guī)血液透析治療的10 位患者，男女各5 例，年齡59.50±11.51 歲，維持性血液透析（MHD）治療70.80±56.42 月，取透析前無菌靜脈血,同期收集10 例年齡性別匹配的健康人血清，配成血清終濃度為10％的M199 培養(yǎng)液。體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞株（HUVECs），以含10％MHD

2、患者血清的M199 培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞，利用半定量逆轉錄-聚合酶鏈反應（RT-PCR）法觀察10％MHD 患者血清對內(nèi)皮細胞表達ICAM-1、MCP-1、IL-8 和VEGF 等細胞因子mRNA 的影響，并以MTT 比色分析法檢測尿毒癥環(huán)境對內(nèi)皮細胞增殖活力的損傷。 然后分別以HO-1 誘導劑氯化高鐵血紅素（hemin）及阻斷劑原卟啉鋅(ZnPP)預處理細胞6 小時后再加入含血清培養(yǎng)基，利用RT-PCR 法和免疫組化法檢測細胞內(nèi)HO

3、-1mRNA 及蛋白表達變化，并觀察其對內(nèi)皮細胞增殖活力，ICAM-1、MCP-1、IL-8 和VEGF 等細胞因子mRNA 表達，以及細胞分泌MCP-1 的影響。細胞分為10％健康人血清組、10％MHD 患者血清組、10％MHD 患者血清＋hemin 10μmol/L 組、10％MHD 患者血清＋hemin30μmol/L 組，10％MHD 患者血清＋hemin 30μmol/L＋ZnPP 10μmol/L 組。 結果：10％

4、MHD 患者血清組內(nèi)皮細胞較10％健康人血清組表達MCP-1、ICAM-1、VEGF、IL-8 mRNA 顯著增加，內(nèi)皮細胞增殖活力顯著下降，并隨著培養(yǎng)基中MHD 患者血清濃度提高損傷作用明顯增強。10％MHD 患者血清可誘導內(nèi)皮細胞內(nèi)HO-1 少量表達。10μmol/L-30μmol/L的hemin 能顯著增加HO-1 的表達，30μmol/L 的hemin 能降低透析患者血清引起的內(nèi)皮細胞ICAM-1、MCP-1 mRNA 過表達，

5、10μmol/L-30μmol/L的hemin 進一步促進內(nèi)皮細胞VEGF mRNA 的表達，ZnPP 可阻斷或減輕這些作用。但是Hemin 預處理對IL-8 mRNA 表達無明顯影響。 結論：利用含MHD患者血清的培養(yǎng)基體外培養(yǎng)HUVECs模擬ESRD患者血管內(nèi)皮環(huán)境，發(fā)現(xiàn)HUVECs被激活，表達炎癥相關基因增加,同時細胞增殖活力明顯受損。Hemin可誘導內(nèi)皮細胞HO-1mRNA和蛋白高表達，從而減輕MHD患者血清導致的內(nèi)皮細