中國鼠傳巴爾通體遺傳多樣性及系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化分析.pdf

1、目的:
　　調(diào)查了解巴爾通體在中國不同地區(qū)嚙齒類動物中的種群分布及流行特征，并研究鼠傳巴爾通體在中國的遺傳多樣性及其系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化關(guān)系，為預(yù)防和控制巴爾通體的人間感染提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。
　　方法:
　　1.本研究依據(jù)中國動物地理區(qū)劃選取采樣點(diǎn)，采用夾夜法捕捉嚙齒類動物后無菌取其脾臟組織，在-80℃冰箱冷凍保存。
　　2.將所采集的各脾臟組織樣品在嚴(yán)格無菌條件下剪取綠豆粒大小于單管中制成勻漿，接種后的培養(yǎng)基置于培養(yǎng)箱中培

2、養(yǎng)，調(diào)節(jié)培養(yǎng)箱內(nèi)二氧化碳濃度為5％，溫度為35℃。胰蛋白大豆瓊脂培養(yǎng)基中混有5％脫纖維羊血。巴爾通體屬的特異性基因枸櫞酸合成酶基因(gltA)長度大小約為379 bp;挑取巴爾通體的疑似菌落，PCR擴(kuò)增該目的基因片段。依據(jù)瓊脂糖凝膠電泳條帶大小判斷陽性菌株并進(jìn)一步擴(kuò)增其16S rRNA、細(xì)胞分裂蛋白基因(ftsZ）、RNA聚合酶亞單位基因（rpoB），將它們的擴(kuò)增產(chǎn)物提交公司并進(jìn)行基因測序。
　　3.對所測gltA、16S rRN

3、A、ftsZ、rpoB基因序列利用NCBI中的BLAST軟件進(jìn)行同源性比對，并利用MEGA7.0.21軟件，采用多位點(diǎn)序列分析(MultilocusSequence Analysis)對gltA、ftsZ、rpoB基因序列進(jìn)行多重比對并進(jìn)行人工校正，然后通過鄰近法(Neighbor-j oining Method)與最大似然法(MaximumLikelihood Method)構(gòu)建分子系統(tǒng)進(jìn)化樹，分析系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化關(guān)系。
　　4.核

4、苷酸及單倍型多樣性分析采用DnaSP5.10.01軟件進(jìn)行。
　　結(jié)果:
　　1.本研究共采集2826份嚙齒類動物脾臟組織樣品，涉及全國15個省市地區(qū)，檢測結(jié)果顯示，757份樣品中存在巴爾通體感染，總感染率為26.79％(757/2826)。所測陽性樣品隸屬于3目，共9個科25個屬62個種，不同種類的嚙齒類動物的感染率不同。此外，不同調(diào)查地區(qū)有巴爾通體感染的嚙齒類動物種類也不盡相同。
　　2.各調(diào)查地區(qū)嚙齒類動物的巴爾

5、通體感染率存在差異，且不同調(diào)查地區(qū)分離到的巴爾通體基因型存在差異。其中格拉漢姆巴爾通體基因型分布于每個調(diào)查地區(qū);除山西省與海南省外，其他調(diào)查地區(qū)都分離出2種及以上的巴爾通體基因型。
　　3.序列的同源性以及遺傳進(jìn)化分析表明，所測嚙齒類動物中主要存在12種巴爾通體基因型，即泰勒巴爾通體（B.taylorii）、格拉漢姆巴爾通體（B.grahamii）、伊麗莎白巴爾通體（B.elizabethae）、日本巴爾通體（B.japonica

6、）、特利波契巴爾通體（B.tribocorum）、森林巴爾通體（B.silvatica）、昆州巴爾通體(B.queenslandensis)、非洲跳鼠巴爾通體（B.jaculi）、菲西巴爾通體（B.phoceensis）、黑瞎子巴爾通體（B.heixiaziensis）、馬賽巴爾通體（B.rattimassiliensis）、B.washoensis。
　　結(jié)論:
　　本研究調(diào)查發(fā)現(xiàn)巴爾通體在中國不同地區(qū)的多種嚙齒類動物中存