我國北方部分鹽堿土硅酸鹽細(xì)菌遺傳多樣性及系統(tǒng)發(fā)育研究.pdf

1、本研究采用RAPD、BOX-PCR、16S rDNA-RFLP與16S rDNA序列分析等技術(shù)系統(tǒng)研究了分離自我國北方天津、河北、山東、黑龍江三江平原等地的有代表性的不同類型鹽堿土的43株硅酸鹽細(xì)菌及2株參比菌株的遺傳多樣性及其在硅酸鹽細(xì)菌系統(tǒng)發(fā)育中的地位和相互關(guān)系。 RAPD分析中，選用了6個(gè)單引物和2個(gè)雙引物(TP-RAPD)進(jìn)行隨機(jī)擴(kuò)增，單引物RAPD聚類結(jié)果在82.5％的相似性水平處，將所有供試硅酸鹽細(xì)菌分成了13個(gè)群；

2、TP-RAPD的分群與單引物RAPD分群存在一定的差異，但提供了更高的解析度，菌株間的遺傳差異進(jìn)一步拉大，全部供試菌株于71％的水平上聚在一起，并于85.5％的水平上分為13個(gè)RAPD群。將6個(gè)單引物與2對(duì)雙引物的擴(kuò)增結(jié)果綜合起來進(jìn)行聚類分析，結(jié)果表明，供試的45株硅酸鹽細(xì)菌菌株在77％的相似水平上聚為一類，在82％相似性水平處，供試菌株被分成了13個(gè)RAPD遺傳群，除TJ28、VKPM B-7519、HB24單獨(dú)成群外，其余菌株組成了

3、10個(gè)遺傳群，群Ⅰ、群Ⅱ、群Ⅲ和群XⅢ基本由黑龍江菌株組成，說明這一地區(qū)的分離菌株具有很強(qiáng)的地域性；群Ⅳ包含參比菌株VKPMB-7517和8個(gè)分別來自天津、河北、山東、黑龍江的供試菌株；群Ⅴ、群Ⅵ、群Ⅷ、群Ⅸ和群Ⅻ中，各分離地菌株在群內(nèi)呈交錯(cuò)分布。RAPD綜合分析結(jié)果與單引物RAPD的聚類結(jié)果相似，實(shí)驗(yàn)條件穩(wěn)定和一致時(shí)，RAPD分析具有較好的可靠性。BOXAIR-PCR結(jié)果擴(kuò)出13種分子量大小的DNA帶，共有10種圖譜類型，聚類結(jié)果在7

4、5％的相似水平上將供試菌株聚為12個(gè)群。來源不同的菌株在群內(nèi)交叉分布，地域性不明顯，兩個(gè)參比菌分別聚于群Ⅵ和群Ⅷ中。 16SrDNA-RFLP酶切圖譜共有9個(gè)遺傳型；聚類分析將供試菌株分為8個(gè)遺傳群，其中，群Ⅰ最大，由30個(gè)菌株組成，包括膠質(zhì)芽胞桿菌(Bacillus mucilaginosus)VKPMB-7519，說明鹽堿土硅酸鹽細(xì)菌大部分與膠質(zhì)芽胞桿菌(Bacillus mucilaginosus)親緣關(guān)系相近。另有6個(gè)菌

5、株構(gòu)成了一個(gè)較大的群。 根據(jù)16S rDNA-RFLP聚類結(jié)果，選取供試硅酸鹽細(xì)菌菌株HLJ01和HBl6作為代表測定了其16S rDNA全序列，其Genbank序列登錄號(hào)分別為EF031269和EF031270。16SrDNA序列分析表明：代表菌株HLJ01與HB16雖然與膠質(zhì)芽胞桿菌(Bacillusmucilaginosus)位于同一個(gè)系統(tǒng)發(fā)育分支，但相似性分別只有96.7％、95.5％；與土壤芽孢桿菌(Bacillus