四川大豆根瘤菌遺傳多樣性和系統(tǒng)發(fā)育研究.pdf

1、從四川廣元、達(dá)州、廣安、遂寧、眉山、內(nèi)江、瀘州、自貢、攀枝花、涼山州等地的47個縣（區(qū)）的大豆根瘤菌中分離得到171株大豆根瘤菌，采用16S rDNAPCR-RFLP、ERIC-PCR及代表菌株的16S rDNA、recA、atpD、glnⅡ、nodC和nifH序列分析方法對其進行了遺傳多樣性及系統(tǒng)發(fā)育研究。
　　16S rDNA PCR-RFLP分析結(jié)果表明，171株待測菌株共產(chǎn)生了39種16SrDNA酶切組合類型，其中有27種

2、為快生根瘤菌，其余12種為慢生根瘤菌。組合類型為19的慢生根瘤菌有58株，所占比例最大，其次是組合類型為3的快生根瘤菌，共34株。
　　ERIC-PCR指紋圖譜分析顯示，快生大豆根瘤菌產(chǎn)生了60種遺傳類型，在約80％相似水平，劃分出A1～A18共18個類群。優(yōu)勢群A1中約71％(20株)的菌株的16S rDNA PCR-RFLP遺傳類型為type3，群A10也有9株為type3。慢生大豆根瘤菌遺傳類型同樣有60種，在78％左右的相

3、似水平所有慢生根瘤菌大致分為B1～B8八大類群。B1～B8均含有16S rDNA PCR-RFLP分析結(jié)果為type19的菌株，其中B2涉及最多（29株），并且B1、B5和B6中所有菌株都屬于type19。
　　結(jié)合16S rDNA PCR-RFLP和ERIC-PCR分析結(jié)果，選出74個代表菌株進行16S rDNA、持家基因(recA、atpD、glnⅡ)和共生基因（nodC、nifH）系統(tǒng)發(fā)育研究。16S rDNA分析結(jié)果顯示，

4、所有代表菌株分別為Sinorhizobium（21株）、Rhizobium(9株)、Agrobacterium(8株)、Aurantimona(4株)、Ochrobactrum（1株）、Klebsiella（1株）和Bradyrhizobium（30株）。
　　持家基因recA、atpD和glnⅡ系統(tǒng)發(fā)育分析結(jié)果與16S rDNA有較好的一致性，但也存在一定的差異，如s96、s152、s163在16S rDNA系統(tǒng)發(fā)育樹中與R.t

5、ibeticum CCBAU85039聚在一起，但在recA、atpD和glnⅡ系統(tǒng)發(fā)育樹中均與參比菌株分離，因此這三個菌株很可能是潛在的新種。為了進一步確定菌株分類地位，將recA、atpD和glnⅡ進行了合并分析(MLSA)。MLSA分析結(jié)果表明，MLSA的系統(tǒng)發(fā)育樹比單個基因的系統(tǒng)發(fā)育樹更穩(wěn)定，如S.fredii、S.xinjiangense等在16S rDNA和atpD系統(tǒng)發(fā)育分析中難以區(qū)別的菌株，在MLSA中都被很好地分開。<

6、br>　　共生基因nodC和nifH系統(tǒng)發(fā)育分析顯示，供試菌株在屬水平上和其他基因分析結(jié)果保持一致，但也有明顯的差異，如快生大豆根瘤菌nodC和nifH系統(tǒng)發(fā)育樹中Sinorhizobium分支上所有供試菌株與S.saheli、S.fredii、S.sojae的參比菌株相似性均為100％?？赡苁遣煌鼍墓采蛑g也可通過橫向轉(zhuǎn)移的方式由一個菌轉(zhuǎn)移到另一個菌，導(dǎo)致盡管一些根瘤菌的遺傳背景不同，但它們都有相同或相似的共生基因。

7、　　綜合幾種方法分析結(jié)果，四川大豆根瘤菌遺傳多樣性非常豐富，優(yōu)勢屬為Bradyrhizobium（82株），其次為Sinorhizobium（53株）。代表菌株系統(tǒng)發(fā)育分析結(jié)果顯示，有12株為B.japonicum，14株為B.diazoefficiens，但有部分B.japonicum的代表菌株和B.diazoefficiens的代表菌株有著相同的16S rDNA RFLP遺傳類型。如代表菌株s10和s8分別為B.japonicum和