氧化應(yīng)激下傷寒沙門菌對THP-1細(xì)胞凋亡影響的研究.pdf

1、傷寒沙門菌(salmonella typhi，S.typhi)是重要的腸道致病菌，屬胞內(nèi)寄生菌，它可引起傷寒等嚴(yán)重疾病。巨噬細(xì)胞是人體主要的吞噬細(xì)胞，它在許多病原體的清除和破壞中起重要作用。傷寒沙門菌在巨噬細(xì)胞內(nèi)生存、增殖的能力與其致病性密切相關(guān)。近來研究發(fā)現(xiàn)傷寒沙門菌感染后可導(dǎo)致巨噬細(xì)胞異常凋亡，從而逃脫機(jī)體天然免疫系統(tǒng)的識別。但傷寒沙門菌引起細(xì)胞凋亡的確切機(jī)制及環(huán)境條件對細(xì)胞凋亡的影響還有待于進(jìn)一步研究。其中就包括傷寒沙門菌被巨噬細(xì)

2、胞吞噬后所遭遇的細(xì)胞內(nèi)的氧化應(yīng)激環(huán)境。本課題擬用H2O2刺激傷寒沙門菌的生長以模擬體內(nèi)的氧化條件，用人白血病細(xì)胞系THP-1細(xì)胞經(jīng)PMA分化的巨噬細(xì)胞為模型，探討傷寒沙門菌及其氧化條件下對巨噬細(xì)胞凋亡的影響，以深入了解傷寒沙門菌的致病機(jī)制。
　　用傷寒沙門菌及其氧化菌分別感染PMA分化的THP-1細(xì)胞，同時設(shè)立空白對照，于作用后2，6，12，24小時終止培養(yǎng)， Annexin V-FITC/PI雙染流式細(xì)胞儀檢測顯示傷寒沙門菌及其

3、氧化菌誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡率與對照組相比明顯增高(P<0.01)；傷寒沙門菌氧化組與傷寒沙門菌相比，巨噬細(xì)胞在2h，6h和8h時間段的凋亡率明顯增高（P<0.05）；隨作用時間的延長，在前12h內(nèi)各組巨噬細(xì)胞的凋亡率逐漸增加（P<0.05）。苔盼藍(lán)染色進(jìn)行活細(xì)胞記數(shù)顯示隨感染時間的延長，各實(shí)驗(yàn)組染成蘭色的壞死細(xì)胞增多（P<0.05），對照組不受影響。
　　采用同樣的方法感染THP-1細(xì)胞，同時設(shè)立正常對照，于作用后6小時終止培養(yǎng)。硫代

4、巴比妥酸法檢測丙二醛(malondialdehyde，MDA)，結(jié)果顯示:傷寒沙門菌氧化組與傷寒沙門菌誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生丙二醛與對照組相比明顯增高(P<0.05)；傷寒沙門菌氧化組與傷寒沙門菌相比，巨噬細(xì)胞產(chǎn)生丙二醛明顯增高(P<0.05)。黃嘌呤氧化酶法檢測超氧化歧化酶(superoxide dismutase，SOD)，結(jié)果顯示:傷寒沙門菌氧化組與傷寒沙門菌誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生超氧化歧化酶與對照組相比明顯降低(P<0.05)；傷寒沙門菌氧

5、化組與傷寒沙門菌相比，巨噬細(xì)胞產(chǎn)生超氧化歧化酶明顯降低(P<0.05)。硝酸還原酶法和ELISA法分別檢測培養(yǎng)液中一氧化氮(NO)和腫瘤壞死因子α(TNF-α)濃度變化，結(jié)果顯示傷寒沙門菌氧化組與傷寒沙門菌組NO和TNF-α濃度較對照組明顯升高（P<0.05），而且在巨噬細(xì)胞凋亡高峰時維持較高水平。
　　四甲基噻唑氮藍(lán)(MTT)法檢測細(xì)胞活力,結(jié)果顯示:傷寒沙門菌氧化組與傷寒沙門菌相比，巨噬細(xì)胞活力明顯降低(P<0.05)。