肉雞腹水綜合征的營(yíng)養(yǎng)調(diào)控及其機(jī)理研究.pdf

1、本研究共進(jìn)行四個(gè)試驗(yàn)，研究了營(yíng)養(yǎng)對(duì)肉雞腹水綜合征(AscitesSyndrome，AS)的影響及可能機(jī)理。在成功建立肉雞AS模型的基礎(chǔ)上，先確定缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)與肉雞AS的關(guān)系，再分別考慮飼糧Vc、飼糧能量水平和來源對(duì)0-21d肉雞AS的影響，從肉雞的生長(zhǎng)速度、養(yǎng)分消化利用率、血液生化指標(biāo)、機(jī)體氧化和抗氧化能力、肉雞單位代謝體重耗氧量、HIF-1α基因表達(dá)等方面來探索營(yíng)養(yǎng)對(duì)肉雞AS的影響及其機(jī)理。 試驗(yàn)一AS對(duì)

2、肉雞生產(chǎn)性能和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)利用率及血液參數(shù)的影響 本試驗(yàn)旨在建立肉雞AS模型，為進(jìn)一步研究肉雞AS的營(yíng)養(yǎng)調(diào)控及其機(jī)理打下基礎(chǔ)。選1d艾維茵(AA)肉雞120只，隨機(jī)分為對(duì)照和試驗(yàn)二個(gè)組，每組6個(gè)重復(fù)，每重復(fù)10只雞。試驗(yàn)組采用低溫(室內(nèi)溫度0-21d為15℃左右，籠內(nèi)溫度0-7d為25℃左右，7-21d為20℃左右)和飼糧添加1.5mg/kg3,3'，5-三碘甲狀原氨酸(3,3'，5-triiodothyronine，T3)的方法誘

3、導(dǎo)肉雞產(chǎn)生AS，對(duì)照組肉雞在正常環(huán)境溫度條件下飼喂不含T3的相同基礎(chǔ)飼糧。試驗(yàn)期為21d。結(jié)果表明：①低溫(Lowambienttemperature,LAT)和T3能成功誘發(fā)0-21d肉雞AS，其發(fā)病率和死亡率分別高達(dá)66.7％和23.3％，能顯著降低生產(chǎn)性能(p＜0.05)，提高心臟指數(shù)(p＜0.05)；②試驗(yàn)組7d肉雞血液紅細(xì)胞數(shù)量(RBC)、血紅蛋白濃度(HGB)、紅細(xì)胞壓積(HCT)和14d肉雞血液紅細(xì)胞分布寬度(RDW)顯著

4、高于對(duì)照組(p＜0.05)；21d肉雞血液平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度(MCHC)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白(MCH)顯著(p＜0.05)低于對(duì)照組；③AS具有降低14和21d肉雞血糖血脂的功能，某些指標(biāo)達(dá)顯著(p＜0.05)或極顯著(p＜0.01)水平；④AS能使14和21d肉雞血液谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、白蛋白/球蛋白、乳酸脫氫酶(LDH)有升高的趨勢(shì)，ALT在21d差異極顯著(p＜0.01)；⑤試驗(yàn)組肉雞在第二周齡時(shí)對(duì)能量、粗脂肪、粗蛋白、鈣、

5、磷的利用率均極顯著(p＜0.01)或顯著(p＜0.05)低于對(duì)照組，第三周時(shí)，試驗(yàn)組肉雞除對(duì)粗蛋白的利用率沒有達(dá)到顯著水平外，其他均極顯著(p＜0.01)或顯著(p＜0.05)低于對(duì)照組；⑥14d肉雞AS的發(fā)病程度與血清GLU呈顯著(p＜0.05)負(fù)相關(guān)，21d肉雞AS的發(fā)病程度與體重(BW)及血清GLU、TG和VLDL呈極顯著(p＜0.01)或顯著(p＜0.05)負(fù)相關(guān)，與血清ALT呈極顯著正相關(guān)(p＜0.01)。通過以上指標(biāo)可看出，

6、本試驗(yàn)肉雞AS模型的建立是成功的。 試驗(yàn)二AS肉雞HIF-1αcDNA的克隆及表達(dá) 本試驗(yàn)旨在探索AS肉雞體內(nèi)是否存在HIF-1α基因，并證明HIF-1α基因與肉雞AS的發(fā)生密切相關(guān)。從21dAS肉雞肺臟中提取RNA，根據(jù)雞胚心室肌細(xì)胞HIF-1α基因序列(登錄號(hào)為NM204297)設(shè)計(jì)引物，采用RT-PCR技術(shù)進(jìn)行cDNA擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分離、純化、回收后與載體pMD18-T連接，轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α，篩

7、選陽性克隆，測(cè)序，并采用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)4只正常肉雞和4只AS患雞肺臟HIF-1αmRNA。結(jié)果表明：已成功克隆的陽性重組子經(jīng)測(cè)序鑒定其片段大小與預(yù)期大小完全一致，為1，576bp。利用BLASTn和BLASTp分析比較表明，該cDNA及其推導(dǎo)的氨基酸序列與雞胚HIF-1αcDNA和氨基酸序列分別具有99％和98％的一致性，但有10個(gè)堿基突變和6個(gè)氨基酸突變。AS肉雞肺臟HIF-1αmRNA表達(dá)豐度比正常肉雞高39％，達(dá)到極顯著水平

8、(p＜0.01)。本試驗(yàn)表明，HIF-1α基因與肉雞AS發(fā)生密切相關(guān)。 試驗(yàn)三飼糧添加Vc對(duì)肉雞AS的影響及其機(jī)理 本試驗(yàn)探討了飼糧添加Vc對(duì)肉雞AS的影響及其機(jī)制。試驗(yàn)采用2×5因子設(shè)計(jì)，研究正常和T3誘導(dǎo)2種條件下，5個(gè)不同梯度飼糧Vc水平對(duì)肉雞生產(chǎn)性能、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)利用率、血液生化指標(biāo)、機(jī)體氧化和抗氧化功能、HIF-1αmRNA表達(dá)、AS發(fā)病率及死亡率的影響。300只1dAA肉雞隨機(jī)分配到10個(gè)處理中，每處理3重復(fù)，試

9、驗(yàn)期為21d。結(jié)果表明：①在肉雞飼糧中添加Vc可以顯著降低肉雞心臟指數(shù)(p＜0.05)，AS發(fā)病率大幅度下降；②飼糧Vc可增進(jìn)肉雞機(jī)體的健康狀況，作用的大小與劑量有關(guān)。900mg/kgVc可將肉雞的全期增重提高5.2％、極顯著降低肉雞肝臟MDA的含量(p＜0.01)、顯著增加肺臟T-AOC的水平(p＜0.05)，飼糧Vc均可顯著(p＜0.05)或極顯著(p＜0.01)降低肺臟HIF-1αmRNA表達(dá)量和血液LDH的活性；③肉雞采食含T3

10、飼糧可極顯著降低肉雞0-21d各階段和全期的平均增重(p＜0.01)，極顯著降低肉雞對(duì)DM、能量和粗脂肪的利用率(p＜0.01)，極顯著增加肉雞血液乳酸和MDA的含量(p＜0.01)，使肝肺臟MDA極顯著增加(p＜0.01)，T-AOC極顯著下降(p＜0.01)，使肺臟Vc含量、肺臟HIF-1αmRNA表達(dá)量和心臟指數(shù)增加達(dá)到顯著(p＜0.05)和極顯著水平(p＜0.05)，使肉雞AS發(fā)病率提高80.7％，AS死亡率大幅度增加。從本試驗(yàn)

11、結(jié)果來看，肉雞飼糧中添加Vc對(duì)肉雞AS有一定的防治作用，以900mg/kg的添加劑量效果最佳；Vc能夠防治肉雞AS的原因是提高了機(jī)體抗氧化能力、降低了血液LDH的活性和乳酸的積蓄、降低了HIF-1α基因的表達(dá)量。 試驗(yàn)四飼糧能量水平和來源對(duì)肉雞AS的影響及其機(jī)理 本試驗(yàn)探討了飼糧能量水平和來源對(duì)肉雞AS的影響及其可能的機(jī)制。試驗(yàn)采用2×2×2因子設(shè)計(jì)，設(shè)2個(gè)能量水平(3.3Mcal/kg；2.8Mcal/kg)、2種能量

12、來源(碳水化合物和大豆油)和2種肉雞狀態(tài)(正常狀態(tài)和T3誘導(dǎo)下AS狀態(tài))。320只1dAA肉雞隨機(jī)分配到8個(gè)處理中，每處理4重復(fù)，試驗(yàn)期為21d。結(jié)果表明：①相對(duì)于低能飼糧(2.8Mcal/kg)，肉雞采食高能飼糧(3.3Mcal/kg)極顯著增加了肉雞的心臟指數(shù)(p＜0.01)、AS發(fā)病率(p＜0.01)、全期增重(p＜0.01)和單位代謝體重耗氧量 (p＜0.01)，顯著降低肝臟SOD的濃度(p＜0.05)，肝臟T-AOC下

13、降了12.5％，MDA增加了20.4％，肺臟HIF-1αmRNA增加了14％；②飼糧脂肪水平和能量來源對(duì)以上指標(biāo)均無顯著性影響(p＞0.05)；③在T3誘導(dǎo)條件下，肉雞心臟指數(shù)(p＜0.01)和肺臟HIF-1αmRNA(p＜0.01)顯著增加，全期增重極顯著降低(p＜0.01)，肝臟T-AOC下降了6.7％，MDA增加了15.1％；④能量和T3對(duì)肉雞心臟指數(shù)具有極顯著的互作效應(yīng)(p＜0.01)，表現(xiàn)為高能飼糧對(duì)肉雞HI提高的幅度在T3條

14、件下更加明顯。從以上試驗(yàn)結(jié)果可看出，高能飼糧(3.3Mcal/kg)可促進(jìn)肉雞AS的發(fā)生，其機(jī)理可能是提高了肉雞的生長(zhǎng)速度、增加了機(jī)體的耗氧量、促進(jìn)了HIF-1α基因的表達(dá)。該效應(yīng)在T3誘導(dǎo)下更加明顯；飼糧能量來源對(duì)肉雞AS無明顯影響。 上述試驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)肉雞發(fā)生AS時(shí)，HIF-1α基因表達(dá)增加；飼糧添加900mg/kg的Vc可以有效預(yù)防肉雞AS的發(fā)生，其原因是提高肉雞機(jī)體抗氧化能力和降低HIF-1α基因表達(dá)；高能飼糧(3.3