補(bǔ)腎醒腦法聯(lián)合羅格列酮改善2型糖尿病小鼠記憶障礙的作用機(jī)制.pdf

1、目的：研究2型糖尿病記憶障礙小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力及其大腦海馬及皮質(zhì)中PI-3K、GSK-3β、Tau蛋白活性和Tau蛋白磷酸化水平的表達(dá)，進(jìn)而明確補(bǔ)腎醒腦法對(duì)2型糖尿病記憶障礙小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力及其大腦海馬胰島素信號(hào)傳導(dǎo)通路的影響及其作用機(jī)制。
　　方法：由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供的健康 SPF級(jí)雄性10周齡 C57BL小鼠給予基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)，為正常對(duì)照組；健康SPF級(jí)雄性10周齡KKay小鼠為實(shí)驗(yàn)組。KKay小鼠以高糖高脂飼

2、料喂養(yǎng)6周后，斷尾取血法檢測(cè)空腹血糖≥13.9mmol/L并穩(wěn)定后隨機(jī)分為模型組對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、醒腦益智劑高劑量+羅格列酮組、醒腦益智劑中劑量+羅格列酮組、醒腦益智劑低劑量+羅格列酮組、予以基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)。陽(yáng)性組每日用馬來(lái)酸羅格列酮片（0.003g·kg-1）灌胃給藥，醒腦益智劑高、中、低劑量+羅格列酮組每日分別用馬來(lái)酸羅格列酮片（0.003g·kg-1）和醒腦益智劑生藥(3.6g·kg-1,7.2g·kg-1,14.4g·kg-1)

3、灌胃給藥，正常對(duì)照組和模型對(duì)照組每日用等體積無(wú)菌生理鹽水灌胃給藥，連續(xù)56天，每周檢測(cè)一次實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體重和血糖。在動(dòng)物分組之前和給藥結(jié)束后分別各進(jìn)行一次 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)，記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果并做統(tǒng)計(jì)和比較。第二次水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，及時(shí)于冰上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)動(dòng)物解剖及樣本制備。采用Elisa法檢測(cè)周圍血漿中胰島素濃度（Ins）水平并計(jì)算胰島素敏感指數(shù)；免疫組化法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)小鼠大腦皮質(zhì)及海馬中PI-3K/Akt的蛋白表達(dá)水平；免疫蛋白印跡法（West

4、ern Blotting)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)小鼠大腦皮質(zhì)及海馬中糖原合酶激酶-3β（GSK-3β）、Tau蛋白及Tau蛋白磷酸化（P-Tau）水平。
　　結(jié)果:（1）模型對(duì)照組相比，正常對(duì)照組小鼠的胰島素敏感指數(shù)明顯上升（P＜0.05）；陽(yáng)性對(duì)照組和醒腦益智劑高、中、低劑量+羅格列酮組正常對(duì)照組小鼠的胰島素敏感指數(shù)均明顯上升（P＜0.05）；
　?。?）與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組小鼠和陽(yáng)性對(duì)照組小鼠的水迷宮平臺(tái)潛伏期明顯偏高（P＜0

5、.05），第五天平臺(tái)象限概率明顯偏低（P＜0.05）；其大腦皮質(zhì)及海馬中PI-3K/Akt蛋白活性表達(dá)均明顯偏低（P＜0.05）、GSK-3β蛋白活性和Tau蛋白磷酸化水平均明顯偏高（P＜0.05），Tau蛋白表達(dá)水平、胰島素受體水平差異不明顯；
　　（3）與模型對(duì)照組相比，陽(yáng)性對(duì)照組與之各項(xiàng)指標(biāo)差異均不明顯。醒腦益智劑大、中、小劑量+羅格列酮各組平臺(tái)潛伏期均明顯偏低（P＜0.05），第五天平臺(tái)象限概率明顯偏高（P＜0.05）；其

6、大腦皮質(zhì)及海馬中PI-3K/Akt蛋白活性表達(dá)均明顯偏高（P＜0.05），GSK-3β和P-Tau水平均明顯偏低（P＜0.05），Tau蛋白表達(dá)水平差異不明顯。其中，以醒腦益智劑中劑量+羅格列酮組效果最為明顯。
　　結(jié)論:在常規(guī)改善胰島素抵抗的基礎(chǔ)上，醒腦益智劑能有效提高2型糖尿病性記憶障礙小鼠的學(xué)習(xí)、記憶能力，其可能的作用機(jī)制為改善大腦海馬胰島素信號(hào)傳導(dǎo)通路，增強(qiáng)PI-3K的活性，降低GSK-3β的表達(dá)，以及Tau蛋白磷酸化水平