版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、腫瘤細(xì)胞多藥耐藥(MDR)的產(chǎn)生是導(dǎo)致化療失敗的主要原因。為克服耐藥,深入研究其發(fā)生發(fā)展過程顯得十分重要。多藥耐藥的機(jī)理非常復(fù)雜。經(jīng)過不斷探索,已經(jīng)發(fā)現(xiàn)并明確了大量與耐藥相關(guān)的因素,已經(jīng)涉及細(xì)胞代謝、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、轉(zhuǎn)錄后修飾等各個(gè)方面。但以往研究結(jié)果表明,仍有許多耐藥現(xiàn)象并非現(xiàn)有的機(jī)制可以完全解釋。隨著研究的不斷深入,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞功能的改變,往往是多種因素變化的結(jié)果。觀察研究在同一時(shí)空中,細(xì)胞蛋白質(zhì)的總體變化及相互作用,才能更全面、更
2、深入的揭示腫瘤細(xì)胞耐藥的真正機(jī)制。 一、對(duì)三種細(xì)胞膜能量依賴的藥物排流“泵”蛋白PgP、MRP、LRP在129例急性髓性白血病病例中表達(dá)情況進(jìn)行了檢測(cè),分析了三者在初發(fā)和難治白血病中各自不同的表達(dá)情況。根據(jù)三種蛋白的表達(dá)情況將LRP或PgP或MRP單一表達(dá)陽性者定為:“單純性”;將L,RP或PgP或MRP兩項(xiàng)以上陽性者定為:“混合型”,觀察這種分型與臨床療效的關(guān)系。同時(shí)用MTT法觀察了白血病細(xì)胞對(duì)柔紅霉素(DNR)的敏感性。結(jié)果
3、發(fā)現(xiàn):在AML初治組中耐藥蛋白表達(dá)陰性者的完全緩解(CR)率75.6%,耐藥蛋白表達(dá)陽性者CR率20.8%(“單純性”21.1%,“混合型”20%);在AML復(fù)發(fā)及難治組中,耐藥蛋白表達(dá)為“混合型”CR率7.6%,耐藥蛋白表達(dá)為“單純性”CR率29.6%,“混合型”CR率低于“單純性”(P<0.05)。表明LRP、PgP和MRP均與耐藥有關(guān),這種“混合型”和“單純性”耐藥分類法,可以作為指導(dǎo)臨床治療和判斷療效的分類法。 二、通過
4、應(yīng)用二維熒光差異電泳結(jié)合質(zhì)譜技術(shù),比較了K562和K562耐藥細(xì)胞之間蛋白質(zhì)表達(dá)質(zhì)和量的變化。二維電泳后經(jīng)過相應(yīng)軟件處理發(fā)現(xiàn)11個(gè)差異蛋白點(diǎn),質(zhì)譜鑒定出9個(gè)表達(dá)差異的蛋白質(zhì),其中5種蛋白質(zhì)與能量代謝有關(guān);2種蛋白質(zhì)與細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān);2種蛋白與細(xì)胞增生相關(guān)。9種差異表達(dá)蛋白質(zhì)中,3種蛋白質(zhì)在K562/ADM中表達(dá)增加,6種蛋白質(zhì)表達(dá)降低。表明二維凝膠電泳結(jié)合質(zhì)譜技術(shù)對(duì)白血病多藥耐藥機(jī)制研究是一種新的可靠手段,可對(duì)揭示耐藥細(xì)胞與敏感細(xì)胞蛋
5、白組學(xué)變化和蛋白質(zhì)之間的相互作用提供新的思路。 三、應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù),比較了K562及其耐藥細(xì)胞系K562/ADM、HL-60及其耐藥細(xì)胞系HL--60/ADM和Jurkat細(xì)胞及其用柔紅霉素處N72小時(shí)后,CRKL的活性變化。發(fā)現(xiàn)在CRKL在K562/ADM和HL-60/ADM中活性明顯增加,而在用柔紅霉素處理后的Jurkat細(xì)胞中其活性與未處理前比較無明顯差異。結(jié)果提示在化療藥物作用下,不同腫瘤細(xì)胞即可以出現(xiàn)機(jī)理相同的耐藥因素
6、,又有各個(gè)不同的特點(diǎn),這為今后針對(duì)耐藥進(jìn)行特異性逆轉(zhuǎn),提供了理論依據(jù)。 四、采用免疫印記及免疫熒光染色法對(duì)已知的四種CRKL傳導(dǎo)途徑中的蛋白質(zhì)進(jìn)行了檢測(cè),發(fā)現(xiàn)在耐藥細(xì)胞中,以Ras和PI3K途徑下游蛋白增加為主,表明CRKL參與耐藥,可能是以此兩種途徑為主。為進(jìn)一步探討CRKL蛋白在K562細(xì)胞耐藥中的作用。 五、針對(duì)已經(jīng)篩選確定的CRKL基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的OligoDNA,退火形成雙鏈DNA,與經(jīng)Hp
7、aI和XhoI切后的pGCL-GFP載體[含U6啟動(dòng)子和綠色熒光蛋白(GFP)]連接產(chǎn)生LV-shCRKL慢病毒載體,PCR篩選陽性克隆,測(cè)序鑒定。用LV-shCRKL,pHelper1.0和pHelper2.0質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞293T細(xì)胞,包裝產(chǎn)生慢病毒,以293T細(xì)胞GFP蛋白的表達(dá)水平測(cè)定病毒滴度。PCR和測(cè)序證實(shí),成功構(gòu)建CR-KLshRNA的慢病毒載體LV-shCRKL。然后分別轉(zhuǎn)染K562/S和K562/ADM并經(jīng)過Wes
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 低氧處理的白血病細(xì)胞蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf
- 白血病細(xì)胞凋亡的亞細(xì)胞蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf
- 慢性粒細(xì)胞白血病急變細(xì)胞株多藥耐藥相關(guān)蛋白的蛋白質(zhì)組學(xué)分析及耐藥機(jī)制研究.pdf
- 急性白血病多藥耐藥基因及多藥耐藥相關(guān)蛋白基因的表達(dá)及臨床研究.pdf
- 基于蛋白質(zhì)芯片的白血病多藥耐藥檢測(cè)技術(shù)及其應(yīng)用研究.pdf
- 急性白血病凋亡相關(guān)基因檢測(cè)和臨床意義及與多藥耐藥研究.pdf
- sirna逆轉(zhuǎn)肺耐藥相關(guān)蛋白表達(dá)介導(dǎo)的白血病細(xì)胞多藥耐藥
- DADS啟動(dòng)人白血病細(xì)胞HL-60細(xì)胞凋亡的蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf
- 白血病相關(guān)蛋白質(zhì)的晶體學(xué)研究.pdf
- 急性白血病患者雌激素受體、多藥耐藥相關(guān)蛋白的檢測(cè)及臨床意義.pdf
- RNA干涉逆轉(zhuǎn)白血病細(xì)胞多藥耐藥的研究.pdf
- 急性白血病細(xì)胞遺傳學(xué)改變及臨床意義.pdf
- 47030.急性淋巴細(xì)胞白血病白細(xì)胞的蛋白質(zhì)組及erk相關(guān)磷酸化蛋白質(zhì)的研究
- 白血病細(xì)胞遺傳學(xué)改變及其臨床意義.pdf
- 急性白血病凋亡因子及多藥耐藥的實(shí)驗(yàn)和臨床研究.pdf
- 兒童急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞差異蛋白質(zhì)組學(xué)分析.pdf
- 多藥耐藥相關(guān)蛋白(MRPs)基因家族在兒童急性淋巴細(xì)胞白血病中的表達(dá)模式及其臨床意義.pdf
- 人白血病細(xì)胞HL-60凋亡啟動(dòng)時(shí)相的亞細(xì)胞蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf
- 白血病比較蛋白質(zhì)組學(xué)和CpG基序生物學(xué)效應(yīng)的初步研究.pdf
- 二烯丙基二硫誘導(dǎo)人白血病細(xì)胞分化的蛋白質(zhì)組研究.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論