兒童急性淋巴細胞白血病細胞差異蛋白質(zhì)組學分析.pdf

1、研究目的:
　　 通過差異蛋白質(zhì)組學技術比較獲得初診急性淋巴細胞白血病(ALL)患兒白血病細胞與健康兒童白細胞表達蛋白質(zhì)譜之間的差異蛋白,為深入研究兒童ALL發(fā)生發(fā)展機制、探索新的診療途徑提供依據(jù)。
　　 研究對象與方法:
　　 1.分別留取15例初診ALL患兒的骨髓細胞(原始+幼稚淋巴細胞比率>90％)為實驗組與15例正常健康體檢兒童外周血細胞為正常對照組,ALL患兒均經(jīng)骨髓細胞學檢查與免疫學分型檢查確診,且無

2、多系增生現(xiàn)象。
　　 2.用淋巴細胞分離液獲取兩組單個核細胞標本并裂解獲得其內(nèi)表達的蛋白質(zhì),進行雙向凝膠電泳(2-DE),保證每例樣本有3次獨立重復試驗。
　　 3.掃描獲得凝膠圖像,應用ImageMaster2D Platinum7.0 Training軟件,根據(jù)體積差異倍數(shù)≥2及Anova P<0.05設置軟件檢測標準,分析獲得兩組差異蛋白點。
　　 4.手工切點進行膠內(nèi)酶切獲取蛋白肽段,進行MALDI-TO

3、F-MS質(zhì)譜分析,連接IPI_human human_v3.07數(shù)據(jù)庫鑒定蛋白質(zhì)。
　　 結(jié)果:
　　 1.實驗組與正常對照組分別檢測到(889±52)、(834±41)個蛋白點。比較獲得實驗組較正常對照組有4個高表達蛋白點和11個低表達蛋白點,等電點多在pH4.5～7之間,分子質(zhì)量集中在18.4～45KD范圍內(nèi)。
　　 2.質(zhì)譜分析、數(shù)據(jù)庫鑒定獲得2個高表達蛋白Glutathione S-transferase

4、 P(谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶P)、Prohibitin(抑制素)及6個低表達蛋白60S acidicribosomal protein P0(60S酸性核糖體蛋白PO)、Pyridoxine-5'-phosphateoxidase(磷酸吡哆醇氧化酶)、Triosephosphate isomerase1 variant(磷酸甘油醛異構(gòu)酶-1)、Peroxiredoxin4(過氧化還原酶4)、Actin,cytoplasmic(細胞質(zhì)肌動蛋白)

5、、Hypothetical protein FLJ26567(假設蛋白FLJ26567)。
　　 結(jié)論:
　　 1.ALL患兒與健康兒童細胞內(nèi)蛋白表達存在明顯差異,并鑒定獲得8種差異蛋白,與兒童ALL的發(fā)生發(fā)展有關。其中谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶P、細胞質(zhì)肌動蛋白與兒童ALL的關系與既往非蛋白質(zhì)組學研究其與白血病的關系結(jié)果相似,抑制素、60s酸性核糖體蛋白PO、磷酸吡哆醇氧化酶、磷酸甘油醛異構(gòu)酶-1、過氧化還原酶4與假設蛋白FLJ2