高血壓左室重構(gòu)中Toll樣受體4-NF-κB信號(hào)途徑的作用.pdf

1、目的：本研究中我們從在體和離體兩個(gè)方面，通過觀察Goldblatt大鼠左室重構(gòu)過程中TLR4表達(dá)與NF-κB的變化情況及其與壓力負(fù)荷、左室心肌血管緊張素Ⅱ含量、心肌纖維化程度的相互關(guān)系，初步探討TLR4在高血壓左室肥厚發(fā)生發(fā)展中的作用；離體實(shí)驗(yàn)中我們用TLR4的特異性激動(dòng)劑脂多糖(lipopolysacchride，LPS)刺激體外培養(yǎng)新生大鼠心肌細(xì)胞(NRVMs)，激活TLR4/NF-κB信號(hào)途徑，觀察TLR4/NF-κB信號(hào)激動(dòng)對(duì)心

2、肌局部的血管緊張素原及AT1受體表達(dá)的調(diào)節(jié)，探討TLR4/NF-κB信號(hào)通路在高血壓左室重構(gòu)發(fā)生發(fā)展中的參與機(jī)制；同時(shí)在體外的離體實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)用我國傳統(tǒng)中藥銀杏葉提取物GBE50干預(yù)TLR4/NF-κB信號(hào)途徑對(duì)心肌局部RAS的影響，以探討銀杏葉提取物在保護(hù)心肌細(xì)胞、防治左室重構(gòu)中的作用機(jī)制。 方法：1.健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠7～9周齡，體重165～195克。采用兩腎一夾法(two-kidney,onec

3、lip，2K1C)建立Goldblatt鼠高血壓模型，70只SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(S組，n=20)，高血壓非藥物干預(yù)組(H組，n=25)和高血壓PDTC干預(yù)組(P組，n=25，術(shù)后2周開始PDTC100mg·kg-1·d-1，SC，持續(xù)6周)。H組和P組在左腎動(dòng)脈置入內(nèi)徑為0.3mm的銀夾(2K1C)，S組行同樣的手術(shù)過程，但不放置銀夾，每周測一次尾動(dòng)脈壓，每兩周測一次超聲心動(dòng)圖，術(shù)后第8周，處死大鼠，留取左室心肌組織。 2

4、.體外培養(yǎng)新生大鼠左室心肌細(xì)胞(NRVMs)，橫紋肌收縮蛋白sarcomericα-actin免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定培養(yǎng)的心肌細(xì)胞，并用TLR4的特異性激動(dòng)劑脂多糖(lipopolysacchride，LPS)以10ng/ml，100ng/ml，1000ng/ml的濃度作用于心肌細(xì)胞，LPS刺激24小時(shí)后應(yīng)用RT-PCR法測定心肌細(xì)胞TLR4，血管緊張素原(Angiotesinogen)及AT1受體mRNA的表達(dá)情況。 3.體外培

5、養(yǎng)新生大鼠左室心肌細(xì)胞(NRVMs)，應(yīng)用NF-κB特異性抑制劑CAPE(caffeicacidphenethylester，咖啡酸苯乙酯)(20μg/ml)預(yù)處理(NRVMs)30min，然后以LPS(1000ng/l)刺激(NRVMs)24h。采用免疫細(xì)胞方法觀察NF-κBp65核易位情況；RT-PCR檢測CAPE對(duì)LPS誘導(dǎo)的TLR4、血管緊張素原及AT1受體mRNA的表達(dá)情況。 4.體外培養(yǎng)新生大鼠心肌細(xì)胞(NRVMs)

6、，銀杏葉提取物GBE50(80μg/ml)預(yù)處理(NRVMs)30min，然后以LPS(1000ng/ml)刺激24h。檢測GBE50對(duì)LPS誘導(dǎo)的TLR4、血管緊張素原及AT1受體mRNA的表達(dá)情況。 結(jié)論：1.Goldblatt大鼠左室重構(gòu)心肌中NF-κB活化增加，抗氧化劑PDTC在抑制NF-κB活化的同時(shí)，降低血壓及改善左室重構(gòu)，提示NF-κB介導(dǎo)的炎癥信號(hào)、氧化應(yīng)激參與了左室重構(gòu)的發(fā)生和發(fā)展，干預(yù)NF-κB及抗炎、抗氧化

7、治療可能是逆轉(zhuǎn)左室重構(gòu)的新靶點(diǎn)。 2.Goldblatt大鼠左室重構(gòu)過程中TLR4mRNA及蛋白水平均明顯增加，并且與NF-κB活化呈強(qiáng)相關(guān)性，提示TLR4/NF-κB信號(hào)通路的活化可能參與了高血壓左室重構(gòu)的發(fā)生發(fā)展， 3.持續(xù)的壓力負(fù)荷及心肌局部AngⅡ可能對(duì)左室心肌TLR4表達(dá)起到重要調(diào)節(jié)作用。 4.PDTC在抑制NF-κB活化的同時(shí)降低TLR4的表達(dá)，而NF-κB又是TLR4的下游分子，表明TLR4與NF-

8、κB之間可能存在著相互協(xié)調(diào)相互促進(jìn)的過程，NF-κB起關(guān)鍵調(diào)節(jié)作用。對(duì)TLR4/NF-κB信號(hào)通路的干預(yù)可能是預(yù)防和逆轉(zhuǎn)高血壓左室重構(gòu)的一個(gè)新的切入點(diǎn)。 5.離體培養(yǎng)的NRVMs中，TLR4/NF-κB信號(hào)激活介導(dǎo)LPS正反饋地調(diào)節(jié)其自身受體TLR4的表達(dá)，TLR4上調(diào)可能加重LPS對(duì)NRVMs的損傷作用。 6.TLR4/NF-κB信號(hào)激活上調(diào)NRVMs血管緊張素原和AT1受體的表達(dá)，提示TLR4/NF-κB介導(dǎo)的心肌局

9、部腎素血管緊張素系統(tǒng)的活化是參與心肌重構(gòu)及其他心血管疾病的發(fā)生發(fā)展機(jī)制之一。 7.NF-κB在LPS介導(dǎo)的上述效應(yīng)中起關(guān)鍵調(diào)節(jié)作用，干預(yù)TLR4/NF-κB信號(hào)可能成為防治心血管疾病新的靶點(diǎn). 8.GBE50可抑制LPS介導(dǎo)的NRVMsNF-κB的激活、TLR4表達(dá)的增加，進(jìn)而減弱TLR4/NF-κB信號(hào)途徑及其后的血管緊張素原和AT1受體的表達(dá)上調(diào)，干預(yù)TLR4/NF-κB信號(hào)通路可能是銀杏葉提取物保護(hù)心肌細(xì)胞，并應(yīng)用