Klotho基因?qū)雽?duì)糖尿病大鼠冠狀動(dòng)脈保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的
　　冠心病在我國(guó)逐年升高的發(fā)病率已嚴(yán)重威脅人們的健康，同時(shí)由于其合并相關(guān)代謝疾病日趨常見，使其病因與治療也更加復(fù)雜化。其中糖尿病已成為冠心病最為常見的合并癥之一。高血糖、胰島素分泌紊亂及脂質(zhì)代謝紊亂的條件下，冠脈硬化的進(jìn)程加速，程度加重。Klotho基因經(jīng)過近年深入研究，發(fā)現(xiàn)其不僅與衰老相關(guān)，還有抑制動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)程的作用，Klotho基因與脂質(zhì)代謝和糖尿病都有相關(guān)性?？紤]到大鼠Klotho基因與人類同源性，本研究旨在利用大

2、鼠做研究對(duì)象，對(duì)大鼠進(jìn)行糖尿病造模，提取Klotho基因?qū)胩悄虿〈笫?，檢測(cè)與冠脈粥樣硬化直接相關(guān)的脂蛋白水平，并測(cè)量冠脈內(nèi)膜厚度及內(nèi)膜中膜厚度比，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定Klotho基因表達(dá)增多是否對(duì)糖尿病大鼠冠脈仍有保護(hù)作用。
　　方法
　　首先取正常SD大鼠腎或腦組織提取總RNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄取得cDNA，利用引物進(jìn)行目的基因Klotho提取，進(jìn)行Klotho基因的PCR擴(kuò)增和載體構(gòu)建:根據(jù)Klotho基因序列時(shí)機(jī)引物，應(yīng)用PCR

3、技術(shù)擴(kuò)增目的基因，經(jīng)過轉(zhuǎn)化將目的基因與腺病毒載體整合，構(gòu)建Klotho載體，進(jìn)一步進(jìn)行腺病毒包裝;隨后，建立糖尿病大鼠動(dòng)物模型，將Klotho基因?qū)胩悄虿〈笫篌w內(nèi)，實(shí)時(shí)定量PT-PCR,Northern印跡等技術(shù)測(cè)定實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組Klotho基因mRNA和蛋白表達(dá)水平，判定Klotho基因?qū)胄Ч?于造模成功后12周時(shí)處死模型動(dòng)物，做血液生化檢測(cè):血低密度脂蛋白、高密度脂蛋白含量，檢測(cè)冠狀動(dòng)脈內(nèi)膜、中膜厚度，并作內(nèi)膜中膜厚度比。

4、>　　結(jié)果
　　高密度脂蛋白在治療組為(0.67±0.06)mmol/L，對(duì)照組為(0.48±0.10)mmol/L，模型組為(0.47±0.10)mmol/L，治療組分別與對(duì)照組和模型組行兩獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)，結(jié)果P＜0.01，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;低密度脂蛋白治療組為(0.44±0.08)mmol/L，對(duì)照組為(0.45±0.10)mmol/L，模型組為(0.44±0.04)mmol/L，經(jīng)兩獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)結(jié)果P＞0.05，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意

5、義。動(dòng)脈內(nèi)膜厚度治療組為(1.74±0.05)μm，對(duì)照組(2.23±0.06)μm，模型組(2.15±0.05)μm，經(jīng)兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)結(jié)果P＜0.01，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。動(dòng)脈內(nèi)膜中膜厚度比治療組為(0.237±0.097)，對(duì)照組(0.308±0.023)，模型組(0.316±0.037)，經(jīng)兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)結(jié)果P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論
　　Klotho基因可以維持對(duì)冠脈血管有保護(hù)作用的高密度脂蛋白在較高水平，