脂肪因子-STAT信號(hào)通路在肥胖型過(guò)敏性哮喘小鼠發(fā)病中的作用研究.pdf

1、目的：
　　1.建立肥胖哮喘小鼠模型。
　　2.檢測(cè)主要脂肪因子瘦素、脂聯(lián)素在肥胖哮喘小鼠肺組織中的表達(dá)情況。
　　3.觀察STAT信號(hào)通路中STAT3、5、6和P-STAT3、6在肥胖哮喘小鼠肺組織中的表達(dá)。
　　4.探討脂肪因子和STATs信號(hào)通路對(duì)肥胖哮喘小鼠是否起著共同調(diào)控的作用。
　　方法：
　　SPF級(jí)雄性3周齡斷乳C57B6J小鼠隨機(jī)數(shù)字法分為4組，每組10只。分別進(jìn)行A組普通飼料+生理

2、鹽水致敏激發(fā)（正常體重組），B組普通飼料+OVA致敏激發(fā)（正常體重哮喘組），C組高脂飼料+生理鹽水致敏激發(fā)（肥胖組），D組高脂飼料+OVA致敏激發(fā)（肥胖哮喘組），比較各組體重。HE染色比較各組小鼠氣道炎癥反應(yīng)，RT-PCR測(cè)定肺組織中各脂肪因子及STAT mRNA的表達(dá)，免疫組織化學(xué)及Western-blot定位和定量檢測(cè)STAT3，P-STAT3，STAT6，P-STAT6蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.成功建立肥胖

3、哮喘小鼠動(dòng)物模型
　　根據(jù)小鼠的癥狀表現(xiàn)、小鼠體重增長(zhǎng)、肺組織病理學(xué)等，提示肥胖哮喘小鼠模型制備成功。高脂飼料喂養(yǎng)2個(gè)月后小鼠平均體重超過(guò)普通維持期飼料喂養(yǎng)小鼠平均體重的1.2倍，達(dá)到肥胖標(biāo)準(zhǔn)。OVA致敏激發(fā)小鼠在激發(fā)后均出現(xiàn)煩躁不安、搔抓面鼻、呼吸淺促、腹肌抽搐、大小便失禁，D組此種表現(xiàn)更為明顯，生理鹽水代替OVA致敏激發(fā)的2組小鼠行為無(wú)明顯異常，僅少數(shù)出現(xiàn)搔抓面鼻、大小便失禁。
　　2.肺組織蘇木精-伊紅染色(HE)染色

4、結(jié)果
　　A組顯示正常小氣道和肺泡結(jié)構(gòu)，支氣管、血管周圍無(wú)明顯炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，粘膜上皮完整。C組顯示部分支氣管和血管周圍可見(jiàn)嗜酸性粒細(xì)胞(EOS)、淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，B組和D組支氣管粘膜下、支氣管和血管周圍可見(jiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　3.qRT-PCR法檢測(cè)肺組織中脂肪因子leptin，adiponectin的表達(dá)。
　　D組leptin mRNA表達(dá)量(17.31±6.02)明顯高于其余3組（A、B、

5、C組依次為1.00±0.86、8.94±3.72、7.66±4.14）（P均＜0.05），B、C兩組leptinmRNA表達(dá)量較A組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，B、C組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。AdiponectinmRNA在A、B、C、D各組小鼠肺組織中的表達(dá)依次為1.00±1.38、26.90±50.11、20.00±21.86、32.32±63.47，各組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4.RT-PCR法檢測(cè)各組小鼠肺組織中STAT3，S

6、TAT5，STAT6 mRNA的表達(dá)
　　STAT3 mRNA在A、B、C、D4組小鼠肺組織中的表達(dá)依次為1.07±0.07，1.25±0.16，1.23±0.05，1.39±0.12，B、C、D組均明顯高于A組(P＜0.05)，D組高于B、C組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，B、C組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。STAT5mRNA在4組中的表達(dá)依次為0.89±0.11，0.93±0.03，0.92±0.06，1.00±0.21，各組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)

7、意義。STAT6 mRNA在4組中的表達(dá)依次為0.96±0.07，1.04±0.05，1.10±0.07，1.18±0.05，B、C、D組均明顯高于A組(P＜0.05)，D組高于B、C組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，B、C組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　5.免疫組化法及western blot結(jié)果。
　　B、C、D組P-STAT3蛋白表達(dá)較A組增加(P＜0.05)，D組P-STAT3蛋白表達(dá)較B、C組高(P＜0.05)，B、C組之間差異

8、無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。STAT3蛋白表達(dá)在各組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。STAT6及P-STAT6在B、D組較A、C高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，B、D之間及A、C之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　6.相關(guān)性分析結(jié)果
　　小鼠肺組織leptin mRNA含量與肺組織P-STAT3蛋白表達(dá)呈顯著正相關(guān)(r=0.853.P＜0.01)。
　　結(jié)論：
　　1.成功制備肥胖哮喘小鼠模型。
　　2.脂肪因子leptin在肥胖哮喘小鼠肺組織的表