CC1007靶向HDAC4復(fù)合物調(diào)節(jié)STAT1逆轉(zhuǎn)卵巢癌順鉑耐藥的研究.pdf

1、目的:
　　研究新型Ⅱa類HDAC抑制劑CC1007能否增強(qiáng)人卵巢癌細(xì)胞株HO8910、SKOV3、SKOV3/DDP對(duì)順鉑的敏感性及產(chǎn)生逆轉(zhuǎn)耐藥的作用，并初步探討CC1007靶向HDAC4復(fù)合物調(diào)節(jié)STAT1活性逆轉(zhuǎn)卵巢癌順鉑耐藥的可能機(jī)制。
　　方法:
　　1.采用體外誘導(dǎo)的方式，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期SKOV3細(xì)胞在含順鉑的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，逐漸增加藥物濃度，誘導(dǎo)出耐藥細(xì)胞株SKOV3/DDP。
　　2.MTT比色法檢測(cè)

2、不同藥物組干預(yù)HO8910、SKOV3、SKOV3/DDP細(xì)胞24h、48h、72h后細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率，實(shí)驗(yàn)分組設(shè)立空白組、對(duì)照組、單用順鉑組、單用CC1007組、順鉑聯(lián)合CC1007組，計(jì)算半數(shù)抑制濃度(IC50)，并繪制濃度-抑制率圖形及時(shí)間-抑制率圖形。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。
　　3.蛋白質(zhì)印跡法分析不同藥物組處理前后HDAC4、STAT1、pSTAT1的表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。
　　4.實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟

3、件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P＜0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，統(tǒng)計(jì)方法使用單因素方差分析、直線回歸分析及t檢驗(yàn)。
　　結(jié)果:
　　1.對(duì)SKOV3細(xì)胞經(jīng)過(guò)順鉑誘導(dǎo)，獲得在順鉑濃度為2.0ug/ml培養(yǎng)基中良好生長(zhǎng)的SKOV3/DDP細(xì)胞株，耐藥指數(shù)RI=耐藥細(xì)胞IC50/親本細(xì)胞IC50=10.251(ug/ml)/3.081(ug/ml)=3.33。
　　2.MTT比色法檢測(cè):(1).單用CC1007組:HO8910細(xì)胞48h半數(shù)

4、抑制濃度IC50為10.831±1.035μM，SKOV3細(xì)胞48h半數(shù)抑制濃度IC50為60.462±1.781μM，SKOV3/DDP細(xì)胞48h半數(shù)抑制濃度IC50為28.355±1.453μM。(2).單用順鉑組: HO8910細(xì)胞24h半數(shù)抑制濃度IC50為5.492ug/ml，48h IC50為1.207ug/ml，72h IC50為0.762ug/ml; SKOV3細(xì)胞24h半數(shù)抑制濃度IC50為5.161ug/ml，48h

5、 IC50為3.081ug/ml，72h IC50為2.570ug/ml; SKOV3/DDP細(xì)胞24h半數(shù)抑制濃度IC50為32.817ug/ml，48hIC50為10.251ug/ml，72hIC50為6.470ug/ml。順鉑對(duì)三種卵巢癌細(xì)胞的抑制率呈明顯濃度和時(shí)間依賴關(guān)系，三種卵巢癌細(xì)胞對(duì)順鉑敏感程度依次為:HO8910＞SKOV3＞SKOV3/DDP細(xì)胞。(3).順鉑聯(lián)合CC1007組:5μMCC1007聯(lián)合順鉑對(duì)HO8910

6、細(xì)胞48h順鉑半數(shù)抑制濃度IC50為0.476ug/ml;10μM CC1007聯(lián)合順鉑對(duì)SKOV3細(xì)胞48h順鉑IC50為1.81ug/ml;10μMCC1007聯(lián)合順鉑對(duì)SKOV3/DDP細(xì)胞48h順鉑IC50為3.572ug/ml。順鉑聯(lián)合CC1007與單用順鉑兩種用藥方式比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，低劑量CC1007對(duì)三種卵巢癌細(xì)胞HO8910、SKOV3、SKOV3/DDP的順鉑增敏作用顯著。
　　3.蛋白質(zhì)印

7、跡法分析:(1).STAT1基礎(chǔ)表達(dá)量與三種細(xì)胞順鉑的IC50呈正相關(guān);(2).HDAC4表達(dá)水平與卵巢癌細(xì)胞順鉑耐藥性呈正相關(guān)，耐藥株SKOV3/DDP較其親本株SKOV3的HDAC4表達(dá)量有所增加;(3).三種卵巢癌細(xì)胞中p-STAT1基礎(chǔ)表達(dá)量均不高，順鉑作用下，HDAC4低表達(dá)的HO8910中p-STAT1表達(dá)量無(wú)明顯改變，HDAC4高表達(dá)的SKOV3/DDP中p-STAT1表達(dá)量明顯增加，CC1007抑制了順鉑誘導(dǎo)的p-STA

8、T1表達(dá)增加，在HDAC4高表達(dá)的SKOV3/DDP中抑制作用最顯著。
　　結(jié)論:
　　1.低劑量CC1007能明顯增強(qiáng)HO8910、SKOV3對(duì)順鉑的敏感性，且一定程度上逆轉(zhuǎn)了耐藥細(xì)胞株SKOV3/DDP耐藥性。
　　2.HDAC4表達(dá)水平與卵巢癌細(xì)胞的順鉑敏感性呈負(fù)相關(guān)，卵巢癌的順鉑耐藥性與HDAC4高表達(dá)從而激活STAT1（p-STAT1表達(dá)增加）相關(guān)。
　　3.CC1007能靶向HDAC4復(fù)合物，抑制HD