湖南家蠶微粒子病的病原體研究.pdf

1、本論文主要從湖南家蠶微粒子病病原體來(lái)源、病原性研究、超微結(jié)構(gòu)、SSU-rDNA基因序列四個(gè)方面入手，試圖探明危害我省蠶種生產(chǎn)的主要病原性微孢子蟲(chóng)的確切來(lái)源、生物學(xué)特征、致病機(jī)理以及該病原與高致病型家蠶微孢子蟲(chóng)(Nosema bombycis,N.b)間差異，并為科學(xué)鑒別家蠶新型病原微孢子蟲(chóng)以及系統(tǒng)地防治家蠶微粒子病提供理論依據(jù)。本論文研究成果主要有： 1、研究證實(shí)我省微粒子病病原主要來(lái)源于桑園昆蟲(chóng)，其中最主要的病原為菜粉蝶微孢子

2、蟲(chóng)(簡(jiǎn)稱(chēng)CFD)和桑尺蠖微孢子蟲(chóng)(簡(jiǎn)稱(chēng)SCH)。 通過(guò)對(duì)野外桑園昆蟲(chóng)的連續(xù)三年抽查檢毒、桑葉浸洗消毒的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，以及湖南省蠶種生產(chǎn)中發(fā)生的微孢子蟲(chóng)與各類(lèi)昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)在顯微鏡下的形態(tài)比較，證實(shí)湖南省蠶種生產(chǎn)上發(fā)生的微孢子蟲(chóng)與昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)交叉感染極其相關(guān)。研究揭示出的昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)發(fā)生率與蠶種毒率成正相關(guān)關(guān)系，為進(jìn)一步防治家蠶微粒子病而進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)和建立預(yù)警機(jī)制具有重要的借鑒作用。 2、對(duì)兩種主要桑園害蟲(chóng)來(lái)源微孢子蟲(chóng)CFD和S

3、CH及與家蠶高致病微孢子蟲(chóng)N.b展開(kāi)了系統(tǒng)的病原性研究，結(jié)果證實(shí)該兩種昆蟲(chóng)來(lái)源的微孢子蟲(chóng)對(duì)家蠶感染力非常強(qiáng)，且都具有弱胚傳性。兩者無(wú)論是原代孢子還是繼代孢子感染家蠶后其病程都較長(zhǎng)，病征不明顯，發(fā)病極其緩慢，對(duì)飼養(yǎng)和制種成績(jī)基本沒(méi)有影響，因此與N.b存在顯著差異，初步判斷為異型孢子。 研究中還發(fā)現(xiàn)CFD、SCH能否成為胚種帶毒種與患病母蛾體內(nèi)的微孢子蟲(chóng)密度沒(méi)有太大的相關(guān)性。 3、通過(guò)解剖感染CFD和SCH微孢子蟲(chóng)的家蠶各種

4、組織，并進(jìn)行顯微鏡鏡檢，發(fā)現(xiàn)在蠶的中腸、絲腺、馬氏管、脂肪等組織中均能檢出微孢子蟲(chóng)，說(shuō)明該兩種孢子蟲(chóng)可全面寄生于家蠶，與N.b一樣屬全身性寄生病原。 4、通過(guò)對(duì)CFD孢子蟲(chóng)的P、F1、F2做電鏡掃描觀察，發(fā)現(xiàn)其長(zhǎng)短徑比例及大小有變化趨勢(shì)，并且隨繼代進(jìn)行，孢子個(gè)體間形態(tài)及大小差異明顯減少，群體趨于整齊一致，并向長(zhǎng)短徑比例縮小、孢子呈現(xiàn)飽滿的方向發(fā)展，與N.b的形態(tài)差別逐漸減少。而SCH比較穩(wěn)定，經(jīng)家蠶繼代后長(zhǎng)短徑體積有變小趨勢(shì)且更

5、接近于N.b。似乎說(shuō)明家蠶的N.b最初來(lái)源于桑園昆蟲(chóng)。 5、用電鏡透射掃描觀察，CFD與SCH兩者結(jié)構(gòu)非常相似，孢子壁由三層組成，極體分為前后兩部分，極絲同型，極絲切面為五層同心圓結(jié)構(gòu)，核成對(duì)出現(xiàn)，核形不規(guī)則，核膜雙層；粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)附含大量的核糖體，孢子后部有后極泡，其周?chē)梢?jiàn)液泡，超微結(jié)構(gòu)這種特征均符合Nosema屬的描述。因此，CFD和SCH微孢子蟲(chóng)均應(yīng)為Nosema屬。 6、通過(guò)設(shè)計(jì)不同的引物，對(duì)孢子蟲(chóng)的DNA模板進(jìn)

6、行了PCR擴(kuò)增，獲得核糖體小亞基RNA基因(SSU-rDNA)的部分基因序列并進(jìn)行了分子生物學(xué)的鑒別與進(jìn)化分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)菜粉蝶孢子蟲(chóng)(CFD)的SSIJ-rDNA基因部分序列片段的總長(zhǎng)度為1128bp、桑尺蠖微孢子蟲(chóng)(SCH)SSU-rDNA基因部分序列片段的總長(zhǎng)度為1133bp，兩者與N.b在基因水平上都存在一定差異，表明兩者都與N.b同屬不同種。家蠶孢子蟲(chóng)(廣東株)與兩種昆蟲(chóng)來(lái)源的孢子蟲(chóng)在樹(shù)型圖上相距較遠(yuǎn)，而菜粉蝶和桑尺蠖相距較近，