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文檔簡介
1、背景:多巴胺屬于兒茶酚胺類神經(jīng)遞質(zhì),其可通過與受體結(jié)合對腎臟水鈉重吸收起到調(diào)節(jié)作用,進而發(fā)揮對血壓調(diào)控的影響。在多巴胺受體的五個亞型中,D5受體的作用尤其引人注目。前期的研究發(fā)現(xiàn)與正常的人D5受體相比,人多巴胺D5受體突變基因F173L(D5F173L)能夠使CHO細胞的O2-產(chǎn)量顯著增加,且其失去刺激腺苷酸環(huán)化酶活性的能力,而D5S390G使CHO細胞的O2-產(chǎn)量明顯減少,刺激腺苷酸環(huán)化酶的活性明顯增加,即D5F173L使功能減弱的D
2、5受體,D5S390G是功能增強的D5受體;D5受體基因敲除(D5-/-小鼠)小鼠血壓明顯升高,心臟重量增加、心肌肥厚;全身表達D5F173L(CMV-D5F173L)基因的轉(zhuǎn)基因小鼠,與CMV-D5S390G和CMV-hD5WT相比,3月齡開始血壓升高,4月齡開始左心室肥厚。所以我們建立心臟特異表達D5F173L/S390G/WT的轉(zhuǎn)基因小鼠,并初步利用心臟特異表達的D5F173L轉(zhuǎn)基因動物模型來研究多巴胺D5受體在心臟肥大發(fā)生中的作
3、用機制。
方法:利用心臟特異啟動子α-MHC構(gòu)建轉(zhuǎn)基因表達載體,顯微注射法建立心臟特異表達的人多巴胺D5F173L/S390G/WT(α-MHC-D5F173L/S390G/WT)轉(zhuǎn)基因小鼠,PCR鑒定轉(zhuǎn)基因小鼠的基因型,Western blot檢測多巴胺D5受體在小鼠心臟組織中的表達。對3月齡α-MHC-D5F173L轉(zhuǎn)基因小鼠及其野生對照,利用智能無創(chuàng)血壓儀測量小鼠的血壓,心動超聲儀檢測轉(zhuǎn)小鼠的心臟結(jié)構(gòu)和功能,光學顯微
4、鏡檢查小鼠心臟的病理改變。
結(jié)果:建立了α-MHC-D5F173L/S390G/WT轉(zhuǎn)基因小鼠。在3月齡,與野生型小鼠比較,α-MHC-D5F173L轉(zhuǎn)基因小鼠血壓無顯著升高,α-MHC-D5F173L轉(zhuǎn)基因小鼠心臟收縮期和舒張期左室內(nèi)徑均增加[(3.26±0.42)比(2.58±0.23)mm,(4.28±0.39)比(3.86±0.25)mm,P<0.05],收縮期和舒張器容積增大[(44.97±14.54)比(24.
5、66±5.34)μL,(83.99±18.42)比(64.83±9.90)μL,P<0.05],射血分數(shù)及短軸縮短率減少[(48.01±8.73)%比(62.18±4.84)%,(24.23±5.15)%比(33.15±3.52)%,P<0.05]。病理學觀察顯示,α-MHC-D5F173L轉(zhuǎn)基因小鼠心腔明顯大于野生型,心室壁明顯變薄,心肌細胞不均勻肥大,心肌間質(zhì)纖維增多。
結(jié)論:α-MHC-D5F173L轉(zhuǎn)基因小鼠的血壓
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