PPARγ及apM1基因多態(tài)性與多囊卵巢綜合征肥胖異質(zhì)性的相關(guān)研究.pdf

1、多囊卵巢綜合征(polycys“covarysyndrome，PCOS)是青春期及育齡婦女最常見(jiàn)的生殖內(nèi)分泌和代謝紊亂性疾病，發(fā)病率呈上升趨勢(shì)；病情涉及下丘腦一垂體一卵巢、。腎上腺、胰腺及糖脂代謝等多個(gè)系統(tǒng)和環(huán)節(jié)，病理機(jī)制尚不完全清楚。PCOS不但影響到排卵和生育，而且還與代謝綜合征、II型糖尿病、心血管疾病及某些癌癥密切相關(guān)．缺乏有效的防治措施。 PCOS以雄激素增多癥(hyperandrogenism，HA)及胰島素抵抗(i

2、nsu¨nresistance，IR)為主要的內(nèi)分泌代謝特征，可有肥胖(obesny，0B)、閉經(jīng)、不孕、多毛、黑棘皮癥及雙卵巢囊性增大等多種表現(xiàn)。肥胖是PCOS的重要特征，臨床和流行病學(xué)資料顯示肥胖型PCOS患者遠(yuǎn)期并發(fā)癥的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)較非肥胖型成倍上升、發(fā)病時(shí)間明顯提前。兩者間的異質(zhì)性及病理機(jī)制值得進(jìn)一步探討。 目前認(rèn)為PCOS是一種多基因參與并和環(huán)境因素相關(guān)的疾病，家族性的無(wú)排卵和多囊卵巢提示該病存在遺傳基礎(chǔ)，PCOS是否存在

3、一個(gè)和幾個(gè)主效基因(majorgene)目前尚未能肯定。本研究采用DNA測(cè)序的方法，檢測(cè)與肥胖及胰島素敏感性有關(guān)的過(guò)氧化物酶增殖體激活受體Y(peroxisomeproliferatoractivatedreceptor—v，PPARy)基因(Pr012Ala及CAC478CAT位點(diǎn))及其下游亦與肥胖和胰島素敏感性有關(guān)的脂聯(lián)素(apM1)基因(+45T／G及+276G／T位點(diǎn))的多態(tài)性，并分析其與PCOS肥胖及IR等指標(biāo)的關(guān)聯(lián)。旨在探討

4、PCOS肥胖異質(zhì)性的遺傳學(xué)背景，為此病分子分型、并發(fā)癥的評(píng)估與預(yù)防奠定初步的基礎(chǔ)。 第一部分多囊卵巢綜合征患者肥胖異質(zhì)性的研究 一、肥胖型PCOS臨床及內(nèi)分泌代謝特征的研究 目的分析總結(jié)肥胖型和非肥胖PCOS患者臨床及內(nèi)分泌代謝特征。方法對(duì)象為肥胖型PCOS(A組)70例、非肥胖型(B組)122例以及同期就診的輸卵管因素不孕癥患者104例(單純肥胖25例，C組；正常體重79例，D組)作對(duì)照。進(jìn)行臨床體征評(píng)分、內(nèi)分

5、泌、代謝指標(biāo)測(cè)定。采用游離雄激素指數(shù)(FAI)評(píng)估雄激素增多癥；FINS、HOMA—IR、IAUC評(píng)估胰島素敏感性，HOMA—IS、△I3。／△G30評(píng)估胰島B細(xì)胞功能。結(jié)果(1)A組的FA(3．40±1．84)高于B組(1．75±1．20)和C組(1．65±0．90)(尸均<0．01)。B組LH／FSH比值(2．41±1．13)高于A、C、D組(尸均<0．01)；A、C、D組問(wèn)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(2)根據(jù)本研究HOMA—IR的切割點(diǎn)1

6、．66，192例患者總的IR發(fā)生率43．23％，A、B組分別為82．86％及20．49％，(PO．05)。(3)BMI、WHR與FAI、HOMA—IR均呈正相關(guān)，尸均<0．01；與LH／FSH比值呈負(fù)相關(guān)(r=一0．345、一0．260，P＜0

7、．01)。結(jié)論肥胖型PCOS患者較非肥胖型存在更嚴(yán)重的內(nèi)分泌及代謝紊亂，胰島β細(xì)胞功能處于代償期，其遠(yuǎn)期并發(fā)癥的防治應(yīng)受到高度重視。 二、脂肪細(xì)胞因子與多囊卵巢綜合征肥胖、胰島素抵抗的關(guān)系 目的研究肥胖和非肥胖型PCOS患者血漿脂肪細(xì)胞因子水平及其與胰島素敏感性的關(guān)系。方法PCOS患者60例分為肥胖組36例、非肥胖組24例以及同期就診的男性因素不孕癥患者26例(正常體重)作對(duì)照組。進(jìn)行BMI、WHR及內(nèi)分泌、代謝指標(biāo)測(cè)定

8、；并應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定血清游離脂肪酸(FFA)、瘦素(LEP)，放射免疫法測(cè)定血清脂聯(lián)素(APN)、TNF—Q及IL一6。采用FINS、HOMA—IR評(píng)估胰島素敏感性。結(jié)果(1)各組脂肪細(xì)胞因子的比較：肥胖組的血清脂聯(lián)素(9．85±7．32mg／L)低于非肥胖組(17．44±9．40mg／L)，P＜0．01；非肥胖組和對(duì)照組問(wèn)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。FFA肥胖組高于非肥胖組和對(duì)照組，P＜0．01。血清IL-6濃度肥胖組和非肥胖組均高于對(duì)照

9、組(P

10、552、0．320、O．292，?33別=0．000、0．005、0．018)，APN與BMI、WHR及HOMA一工R呈負(fù)相關(guān)(r分另0=一0．311、一0．394、一0．282，e33另0=0．005、0．000、O．023)。校正BMI等因素后TNF—α與HOMA一工R亦呈正相關(guān)(r=O．466，Ia-_0．025)。(3)多元逐步回歸分析表明，BMI和TNF—Q是FINS的的獨(dú)立影響因素，其貢獻(xiàn)度分別為O．534和0．395；脂聯(lián)

11、素是除FINS、FPG、BMI外，對(duì)HOMA—IR的獨(dú)立影響因素，其貢獻(xiàn)度為一0．165。結(jié)論FFA、瘦素、TNF—α水平的增高和脂聯(lián)素的降低與肥胖型PCOS的胰島素抵抗相關(guān)，而TNF—α的增高可能在非肥胖型PCOS的胰島素抵抗中發(fā)揮著主要的作用。 第二部3)-PPfiRY基因與多囊卵巢綜合征肥胖異質(zhì)性的相關(guān)研究 目的明確多囊卵巢綜合征(PCOS)患者PPARY基因第二、第六兩個(gè)外顯子上Pr012Ala及CAC478CA

12、T多態(tài)性與肥胖、胰島素抵抗的關(guān)系。方法檢測(cè)¨8例PCOS患者和同期就診的輸卵管因素不孕癥患者79例(年齡及BMI與PCOS患者匹配)的人體測(cè)量學(xué)指標(biāo)、生殖內(nèi)分泌、糖脂代謝等指標(biāo)；并行PCR擴(kuò)增目的片斷、DNA測(cè)序分析單核苷酸多態(tài)性。結(jié)果(1)197例研究對(duì)象無(wú)一例舭a12Ala純合子，對(duì)照組Pr012舭a基因型占17．7％(14／79)高于?COS組的5．9％(7／¨8)，P<0．01；肥胖型和非肥胖型PCOS間Pr012Ala多態(tài)性分

13、布無(wú)差異。PCOS患者中，Ala等位基因攜帶者的TNF-Q、IAUC、HOMA-IS水平高于Pr012Pro純合子，P＜O．05；這種變化未見(jiàn)于對(duì)照組。但對(duì)照組Prol2Ala基因型的BMI及WHR高于Pr012Pro純合子，P＜0．05。(2)PCOS組CAC478CAC基因型為63．8％高于對(duì)照組的46．2％，P＜O．05；肥胖型PCOS的CAC478CAC基因型占75．6％高于非肥胖型PCOS的57．3％，P<0．05。PCOS患

14、者中CAC478CAC純合子較CAT等位基因攜帶者的BMI增高、LH水平低，／a-_0．019。BinaryLogis“c回歸分析證實(shí)，CAC478CAT多態(tài)性和PCOS發(fā)病可能有關(guān)，并可能與PCOS肥胖異質(zhì)性相關(guān)。結(jié)論P(yáng)PARY基因第二、第六外顯子的CCA—GCA、CAC—CAT多態(tài)性均可能對(duì)PCOS發(fā)病具保護(hù)作用。CAC等位基因與PCOS肥胖異質(zhì)性關(guān)系密切；Ala等位基因可能與正常人群的肥胖相關(guān)，但與PCOS病情及肥胖異質(zhì)性并非直接

15、相關(guān)。 第三部分apM1基因-9多囊卵巢綜合征肥胖異質(zhì)性的相關(guān)研究 目的研究apMl基因第二外顯子+45T／G及第二內(nèi)含子+276G／T多態(tài)性與多囊卵巢綜合征(PCOS)發(fā)病的關(guān)系，并分析其與血清脂聯(lián)素水平及肥胖、胰島素抵抗的關(guān)系。方法檢測(cè)¨4例PCOS患者(肥胖組45例、非肥胖組69例)和同期就診的輸卵管因素不孕癥患者78例(年齡及BMI與PCOS患者匹配)的人體測(cè)量學(xué)指標(biāo)、生殖內(nèi)分泌、糖脂代謝指標(biāo)及脂肪細(xì)胞因子；并行

16、PCR擴(kuò)增目的片斷、DNA測(cè)序分析單核苷酸多態(tài)性。結(jié)果(1)第二外顯子位點(diǎn)G等位基因分布頻率在PCOS組(30．7％)高于對(duì)照組(19．87％)，P=0．018；這種分布頻率在肥胖和非肥胖PCOS間差異不明顯。提示G等位基因和發(fā)病有關(guān)，和PCOS肥胖異質(zhì)性無(wú)關(guān)，BinaryLogistic回歸分析也證實(shí)了這一點(diǎn)。但是在PCOS中，GG基因型FINS、HOMA-IR低于TT和TG基因型、SHBG高于TT和TG基因型，P＜O．05。(2)第

17、二內(nèi)含子的結(jié)果：T等位基因分布頻率在肥胖型PCOS組(38．9％)高于非肥胖型PCOS(23．2％)，P=O．0¨；這種分布頻率在PCOS和對(duì)照組問(wèn)差異不明顯。在PCOS患者中，TT基因型FINS、HOMR-IR、BMI和瘦素水平均高于GT和GG基因型，脂聯(lián)素也呈低水平，P＜O．05。結(jié)論45(T／G)多態(tài)性可能與PCOS發(fā)病有關(guān)，但G等位基因并非直接導(dǎo)致PCOS的IR。276(G／T)多態(tài)性與PCOS肥胖異質(zhì)性相關(guān)；T等位基因攜帶者更