齊多夫定細胞內磷酸化過程的動力學研究.pdf

1、目的:在細胞培養(yǎng)體系中研究細胞內核苷類藥物磷酸化的動力學過程，以期對細胞內藥物活性成分濃度變化情況有更為直接的理解。在健康人中給藥，探究血漿內原藥濃度與單個核細胞中原藥及磷酸化產物濃度的變化規(guī)律及磷酸化動力學過程，為核苷類藥物的臨床用藥提供參考信息。
　　方法:①建立化學合成齊多夫定一磷酸、二磷酸化物及三磷酸化物的方法，并用制備液相色譜方法分離純化。②建立LC-MS/MS測定血漿內AZT及細胞內AZT、AZT-MP、AZT-DP和

2、AZT-TP濃度的方法。③利用cck-8法考察齊多夫定對Molt-4和HUVCEs的細胞毒性作用，并進行Molt-4及HUVCEs細胞培養(yǎng)體系中齊多夫定細胞內磷酸化過程的動力學研究。④健康志愿者單次給藥600 mg，用Ficoll密度梯度離心法分離血漿及外周血單個核細胞，測定給藥后不同時間受試者血漿及單核細胞內齊多夫定及其磷酸化代謝物的濃度，用DAS2.0軟件計算藥動學參數(shù)，研究齊多夫定及其磷酸化代謝物在血漿及單個核細胞中的動力學過程。

3、
　　結果:①利用化學合成法成功合成齊多夫定一、二、三磷酸化物。②經方法學考察，本研究中建立的測定細胞中AZT、AZT-MP、AZT-DP及AZT-TP濃度的LC-MS/MS法符合相關指導原則對生物樣本測試方法的要求。③細胞培養(yǎng)體系中磷酸化產物的生成主要是以一磷酸化物為主，二磷酸及三磷酸化物的細胞內濃度遠低于一磷酸化物。④人體試驗中，血漿中齊多夫定均以原型存在，細胞內磷酸化產物以一磷酸化物為主，二磷酸及三磷酸化物的濃度很低，與體外

4、實驗結果一致;依據(jù)血漿與細胞內齊多夫定濃度計算所得的藥動學參數(shù)，以及細胞內不同磷酸化產物之間的藥動學參數(shù)存在差異。血漿內齊多夫定的Tmax為0.583 h，t1/2為2.022 h;細胞內齊多夫定的Tmax為1.083 h，t1/2為2.493 h;細胞內齊多夫定一磷酸化物的Tmax為1.5 h，t1/2為13.428 h;細胞內齊多夫定二磷酸化物的Tmax為1.417 h，t1/2為8.285 h;細胞內齊多夫定三磷酸化物的Tmax為