“腎藏精”的理論探討及補(bǔ)腎法防御擬除蟲(chóng)菊酯損害的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的 1.以甲氰菊酯染毒妊娠大鼠模型為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，觀察、分析甲氰菊酯對(duì)母體、妊娠及子代生長(zhǎng)發(fā)育和生殖能力的影響，評(píng)估甲氰菊酯對(duì)免疫系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)及生殖系統(tǒng)的可能損害，并初步揭示其機(jī)理。 2.從中醫(yī)病因病機(jī)的角度分析甲氰菊酯的病因分類、致病特點(diǎn)及病理特性。 3.對(duì)中醫(yī)“腎藏精”理論進(jìn)行補(bǔ)充，使其更全面完整。 方法 1.甲氰菊酯染毒大鼠妊娠階段的研究：以144只成年健康妊娠的SD大鼠為研究對(duì)象。分6組，

2、其中模型組、模型+中藥高劑量組、模型+中藥中劑量組、模型+中藥低劑量組、模型+多力瑪組共5組自妊娠第1天至第15天經(jīng)口灌服1/20LD50(即6.775mg/kg)甲氰菊酯，每日1次，染毒4-6小時(shí)后分別灌服生理鹽水、相當(dāng)于成人等效劑量或其2倍、3倍的中藥藥液及多力瑪溶液(0.2克/kg)。另一組為空白對(duì)照組。妊娠中期(第15天)殺死半數(shù)母鼠，余下一半繼續(xù)妊娠至分娩。觀察母鼠的一般情況、母鼠體重增長(zhǎng)情況、妊娠情況、分娩情況，以及脾、卵巢

3、、子宮等臟器系數(shù)、胎鼠數(shù)量及發(fā)育情況，并在孕中期及分娩后采血檢測(cè)β—內(nèi)啡肽、內(nèi)分泌激素E2、Ca2+-ATP等指標(biāo)。 2.甲氰菊酯染毒大鼠分娩階段的研究：以實(shí)驗(yàn)各組母鼠分娩階段為研究對(duì)象。觀察活胎率、存活率、妊娠天數(shù)及細(xì)胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10等指標(biāo)。 3.甲氰菊酯染毒大鼠子代胎鼠階段的研究：以妊娠第15天處死之母鼠子宮內(nèi)的胎鼠為研究對(duì)象。觀察胎仔外形有無(wú)畸形；胎鼠總數(shù)、吸收胎數(shù)、活胎數(shù)，計(jì)算活胎

4、率；測(cè)定胎鼠體重、身長(zhǎng)、尾長(zhǎng)。 4.甲氰菊酯染毒大鼠子代仔鼠階段的研究：以實(shí)驗(yàn)各組母鼠分娩的仔鼠為研究對(duì)象。觀察并比較仔鼠出生時(shí)及出生后同一時(shí)間點(diǎn)發(fā)育情況、出生存活率和哺育存活率；觀察并記錄出毛、張耳、睜眼、睪丸下降、陰道張開(kāi)等生理發(fā)育指標(biāo)的出現(xiàn)時(shí)間，以及前肢定位反射、平面翻正反射、空中翻正反射等斷乳前神經(jīng)行為發(fā)育指標(biāo)達(dá)標(biāo)時(shí)間；進(jìn)行避暗逃避試驗(yàn)、迷宮試驗(yàn)、跳臺(tái)試驗(yàn)，觀察仔鼠的學(xué)習(xí)和記憶能力。仔鼠出生后第4天和第10天每組隨機(jī)取1

5、2只，斷頭處死后，快速剝?nèi)∪X，漂洗去血污并去除腦膜后以冷生理鹽水作勻漿介質(zhì)，研磨制成10％腦組織勻漿液，取上清液測(cè)定仔鼠腦NO含量及NOS活性。 結(jié)果 1.在染毒孕鼠既不出現(xiàn)明顯的中毒癥狀和體征，又能檢測(cè)出內(nèi)在的神經(jīng)、內(nèi)分泌、免疫毒性，是一個(gè)合理的模擬中毒量。本實(shí)驗(yàn)以1/20LD50劑量甲氰菊酯染毒基本能較好地體現(xiàn)實(shí)驗(yàn)意圖。染毒模型符合實(shí)驗(yàn)要求。 2.補(bǔ)腎藥的防御修復(fù)作用稍滯后于甲氰菊酯的損傷，但同時(shí)也反映了免

6、疫系統(tǒng)調(diào)整本身的復(fù)雜性以及補(bǔ)腎藥對(duì)其的調(diào)整有著一個(gè)“微調(diào)”的方式和過(guò)程。 3.提示了補(bǔ)腎的方藥有可能不是單純的升高或降低β-內(nèi)啡肽，而是通過(guò)穩(wěn)定血漿β-內(nèi)啡肽的濃度趨于正常來(lái)達(dá)到調(diào)節(jié)免疫功能，減輕機(jī)體損害的作用。多力瑪在β-內(nèi)啡肽的檢測(cè)中，前后幾乎沒(méi)有變化，作用不明顯。 4.實(shí)驗(yàn)所設(shè)計(jì)的染毒量和染毒時(shí)間，在妊娠中期階段對(duì)生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)還沒(méi)有反映出直接、強(qiáng)烈的毒性作用。因此，在毒性作用不太強(qiáng)烈的情況下，甲氰菊酯可能首先干擾

7、了免疫調(diào)節(jié)，在免疫狀態(tài)偏離正常而又得不到及時(shí)恢復(fù)的情況下，進(jìn)而影響NIM系統(tǒng)，從而干擾和損傷生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)。 5.中藥補(bǔ)腎藥有保護(hù)和促進(jìn)生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)的作用，并且促進(jìn)E2的水平可能是反映指標(biāo)之一。但中藥的劑量與保護(hù)和促進(jìn)生殖內(nèi)分泌功能之間不具有正比的關(guān)系，在實(shí)驗(yàn)中，低劑量的作用量反而有著更好的效果， 6.盡管在分娩時(shí)染毒過(guò)程已經(jīng)停止了一段時(shí)間，但甲氰菊酯對(duì)孕鼠的生殖毒性依然存在。并在子鼠上顯示出甲氰菊酯毒性作用。

8、 7.在甲氰菊酯的干擾下，妊娠出現(xiàn)了Th1/Th2細(xì)胞應(yīng)答失衡現(xiàn)象。 8.子代在胎鼠階段甲氰菊酯的毒性作用不明顯，但進(jìn)入仔鼠階段后，甲氰菊酯的毒性作用明顯呈現(xiàn)。 9.甲氰菊酯對(duì)仔鼠的毒性作用是多系統(tǒng)的、整體性的。 10.甲氰菊酯延遲了神經(jīng)發(fā)育，但在子代仔鼠的神經(jīng)系統(tǒng)功能上沒(méi)發(fā)現(xiàn)異常。 11.提示這時(shí)的NOS、iNOS和NO濃度除了生理性的遞增外，甲氰菊酯的毒性也造成了其濃度急劇上升，從而對(duì)神經(jīng)生理發(fā)育造成

9、影響。 結(jié)論 1.實(shí)驗(yàn)顯示出補(bǔ)腎方藥有防御擬除蟲(chóng)菊酯中的典型藥物——甲氰菊酯的毒性作用。其中以低劑量中藥反映出較好的防御效果，提示系統(tǒng)調(diào)整本身的復(fù)雜性以及補(bǔ)腎藥對(duì)其的調(diào)整有著一個(gè)“微調(diào)”的方式和過(guò)程。這種方式切合于毒性不強(qiáng)身體機(jī)能尚可的復(fù)雜系統(tǒng)的修復(fù)和防御。 2.甲氰菊酯的毒性能夠傳延至子代，對(duì)孕鼠、胎鼠和子鼠的損害具有多樣性，對(duì)神經(jīng)、生殖內(nèi)分泌、免疫系統(tǒng)，以及子代的生長(zhǎng)發(fā)育都顯示出毒性作用。中醫(yī)視角來(lái)觀察，主要

10、受影響的是中醫(yī)的腎系統(tǒng)。其作用機(jī)理可能包括干擾β-EP、E2、Th1/Th2平衡，NO濃度等多種的調(diào)控因子，擾亂了NIM的整體調(diào)節(jié)功能。 3.在病因分類上建議將外感因素命名為廣義的毒氣，包括六淫、癘氣及狹義毒氣三部分，其病因?qū)儆讵M義毒氣部分。本研究還對(duì)擬除蟲(chóng)菊酯的毒性特點(diǎn)從中醫(yī)病因病機(jī)學(xué)角度進(jìn)行了歸納總結(jié)：①傳入途徑直接進(jìn)入人體內(nèi)部；②性質(zhì)屬陰邪一類；③病位上主要病及中醫(yī)腎系統(tǒng)。 4.中醫(yī)“腎藏精”的“藏”除了傳統(tǒng)的“蜇