西格列汀對(duì)糖尿病大鼠的骨保護(hù)作用及其與TLR4-NF-κB表達(dá)關(guān)系的研究.pdf

1、目的：
　　1.觀察西格列汀干預(yù)對(duì)高脂高糖聯(lián)合STZ誘導(dǎo)糖尿病大鼠的骨密度和骨轉(zhuǎn)換指標(biāo)的影響；
　　2.觀察西格列汀對(duì)糖尿病大鼠的骨保護(hù)作用與TLR4/NF-κB表達(dá)的關(guān)系。
　　方法：
　　1.糖尿病模型：選用60只雄性SD大鼠，分為對(duì)照組(NC組,n=15）和造模組（n=45）， NC組予標(biāo)準(zhǔn)大鼠飼料，造模組予高糖高糖飼料(HSFDs)8周。造模組8周后禁食12h，空腹腹腔注射1％STZ30mg/kg，NC組

2、予等量生理鹽水。72小時(shí)后尾靜脈采血，羅氏血糖儀檢測(cè)空腹血糖≥16.7mmol/L者確定為2型糖尿病大鼠；
　　2.藥物干預(yù)：將造模成功的31只大鼠隨機(jī)分為2型糖尿病組（T2DM組,n=16）和2型糖尿病西格列汀干預(yù)組（SitA組,100mg/kg·d,n=15）。造模成功2周后開(kāi)始行西格列汀(Sitagliptin, SitA)干預(yù)。西格列汀溶于生理鹽水，于每天09:00灌胃。NC組及T2DM組予等計(jì)量生理鹽水，干預(yù)時(shí)間為20周

3、，正常組給予標(biāo)準(zhǔn)飼料，余兩組繼續(xù)HSFDs喂養(yǎng)；
　　3.相關(guān)指標(biāo)觀察：20周末檢測(cè)各組空腹血糖、體重；0、20周末空腹?fàn)顟B(tài)下行腹腔注射葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)(IPGTT)，并計(jì)算曲線下面積(AUC)；取腹主動(dòng)脈血清并保存，放射免疫法檢測(cè)各組大鼠血清胰島素；
　　4.骨密度及骨轉(zhuǎn)換指標(biāo)檢測(cè)：DEXA法測(cè)定各組下肢、上肢、軀干、脊柱及全身骨密度(BMD)；酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清OCN和TRAP5b活性；AMP緩沖液法檢測(cè)ALP水平；<

4、br>　　5.相關(guān)基因及蛋白的檢測(cè)：應(yīng)用RT-PCR及Western Blot測(cè)定大鼠股骨BMP-2、TLR4及NF-κB的mRNA及蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1. STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠呈現(xiàn)明顯的高血糖狀態(tài)，平均空腹血糖達(dá)(18.83±2.05)；與NC組相比，造模組IPGTT曲線下面積AUC明顯增高(P<0.05)；
　　2. SitA干預(yù)20周后，與NC組相比，T2DM組空腹血糖、AUC明顯升高(P<0.0

5、5)，血清胰島素、體重減少(P<0.05)；SitA組空腹血糖、AUC升高(P>0.05)，血清胰島素降低(P>0.05)，體重?zé)o明顯差異(P>0.05)；與 T2DM組相比，SitA組空腹血糖、AUC明顯降低(P<0.05)，血清胰島素、體重明顯升高(P<0.05)；
　　3.與NC組比較，T2DM組下肢、上肢、軀干、脊柱及全身骨密度均降低，其中以下肢、上肢、全身骨密度下降更明顯(P<0.05)，SitA組下肢、上肢、脊柱及全身

6、骨密度降低(P>0.05)，軀干骨密度升高(P>0.05)；與T2DM組比較，SitA組各部位骨密度均增加，以下肢、上肢及全身骨密度升高更明顯(P<0.05)；
　　4.與NC組比較，T2DM組ALP表達(dá)降低(P<0.05)，OCN表達(dá)降低(P>0.05)，TRAP5b表達(dá)升高(P<0.05)，SitA組ALP表達(dá)降低(P<0.05)，OCN表達(dá)升高(P<0.05)，TRAP5b表達(dá)升高(P>0.05)；與T2DM組比較，SitA

7、組ALP表達(dá)升高(P<0.05)，OCN表達(dá)升高(P<0.05)，TRAP5b表達(dá)降低(P<0.05)；
　　5.與NC組相比，T2DM組大鼠股骨TLR4、NF-κB mRNA及蛋白表達(dá)均顯著增高(P<0.05)，BMP-2表達(dá)降低(P<0.05)，SitA組TLR4、NF-κB mRNA及蛋白表達(dá)均增高(P>0.05)，BMP-2表達(dá)降低(P>0.05)；與T2DM組相比，SitA組TLR4、NF-κB表達(dá)降低(P<0.05)，