重復(fù)持續(xù)性+Gz暴露對(duì)大鼠肝組織應(yīng)激損傷的分子機(jī)制與防護(hù)的初步研究.pdf

1、第一章，重復(fù)持續(xù)性+Gz暴露對(duì)大鼠肝組織的損傷及JNK/c-Jun表達(dá)的影響
　　目的：1.建立正加速度重復(fù)作用下的動(dòng)物模型,觀察血漿谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)水平變化以及肝臟病理組織學(xué)變化,探討不同水平的重復(fù)持續(xù)性正加速度(+Gz)暴露下大鼠肝臟細(xì)胞損傷的機(jī)制及變化規(guī)律;2.觀察不同水平的重復(fù)持續(xù)性正加速度(+Gz)對(duì)肝臟細(xì)胞即早基因c-jun的表達(dá)的影響;3.探討不同水平的重復(fù)持續(xù)性加速度(+Gz)對(duì)肝臟細(xì)胞J

2、NK/c-jun表達(dá)的影響。4.探討不同水平的重復(fù)持續(xù)性正加速度(+Gz)重復(fù)作用下大鼠肝臟組織應(yīng)激損傷的分子機(jī)制。
　　方法：清潔級(jí)、成年雄性Wistar大鼠24只,動(dòng)物領(lǐng)回后先飼養(yǎng)l周,隨機(jī)分為四組,每組6只(n=6),分別為對(duì)照組,+2Gz組、+6Gz組、+10Gz組。離心機(jī)實(shí)驗(yàn),其中,對(duì)照組(control)用特制的固定裝置將大鼠固定于動(dòng)物離心機(jī)轉(zhuǎn)臂上,俯臥位,頭向軸心,離心機(jī)半徑為2m,5min;+2Gz組、+6Gz組、

3、+10Gz組固定方法同對(duì)照組,加速度增長(zhǎng)率1G/s,峰值作用時(shí)間3 min,間隔30min,重復(fù)5次。于完成后30min10％水合氯醛麻醉取標(biāo)本,HE染色后光鏡觀察肝組織形態(tài)學(xué)變化,熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)c-jun基因mRNA的表達(dá),Western blotting檢測(cè)p-c-jun、c-jun、p-JNK及JNK蛋白的表達(dá),并測(cè)定血漿谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)。
　　結(jié)果：與對(duì)照組相比,+6Gz組、+10Gz組血

4、漿ALT和AST水平明顯升高,與+2Gz組比較,+6Gz組、+10Gz組血漿ALT和AST水平明顯升高,以+10Gz組更為顯著(P<0.05)。與對(duì)照組相比,+6Gz組、+10Gz組的c-jun mRNA表達(dá)明顯升高,與+2Gz組比較,+6Gz組、+10Gz組c-jun mRNA表達(dá)明顯升高,以+10Gz組更為顯著(P<0.05);c-jun蛋白及其活化形式p-c-jun表達(dá)隨G值增加而上升。與對(duì)照組比較,其他各組JNK蛋白表達(dá)無(wú)變化,

5、但其活化形式p-JNK表達(dá)明顯增強(qiáng)(P<0.05),并隨G值增加上升。HE染色顯示,+6Gz、+10Gz組肝細(xì)胞排列紊亂,形態(tài)不規(guī)則,細(xì)胞間隙不清晰,空泡樣改變,且隨G值增長(zhǎng)而加重。
　　結(jié)論：重復(fù)持續(xù)性低正加速度(+2Gz)環(huán)境對(duì)肝臟細(xì)胞無(wú)明顯影響,而重復(fù)持續(xù)性正加速度(+6Gz以上)環(huán)境可以導(dǎo)致肝臟細(xì)胞產(chǎn)生應(yīng)激性損傷。重復(fù)持續(xù)性低正加速度(+2Gz)環(huán)境對(duì)肝臟細(xì)胞JNK/c-jun信號(hào)通路表達(dá)無(wú)明顯變化,而重復(fù)持續(xù)性正加速度(

6、+6Gz以上)導(dǎo)致肝臟細(xì)胞c-jun/p-c-jun以及p-JNK表達(dá)增強(qiáng),且隨G增長(zhǎng)而表達(dá)增強(qiáng)。JNK/c-jun信號(hào)通路可能在肝臟應(yīng)激性損傷過(guò)程中起著重要作用。
　　第二章，SP600125對(duì)重復(fù)持續(xù)性高+Gz暴露下大鼠肝臟細(xì)胞損傷的保護(hù)作用
　　目的:探討JNK抑制劑SP600125對(duì)重復(fù)持續(xù)性高正加速度(+Gz)作用下大鼠肝臟細(xì)胞JNK/c-jun表達(dá)的影響及其作用機(jī)制。
　　方法:近交系成年雄性Wistar大

7、鼠18只,隨機(jī)分為對(duì)照組、+10Gz組、SP600125組(藥物組),每組6只。其中,對(duì)照組于離心機(jī)轉(zhuǎn)臂上固定5分鐘;+10Gz組固定于離心機(jī)轉(zhuǎn)臂上,俯臥位,頭向軸心,G值分別為+10Gz,峰值作用時(shí)間3min,加速度增長(zhǎng)率1 G/s,間隔30min,連續(xù)5次;SP600125組為離心前半小時(shí)給予腹腔注射SP600125,離心方式同+10Gz組。分別于離心后30min處死,取肝組織分別做HE染色光鏡觀察,用q-PCR檢測(cè)c-jun基因m

8、RNA的表達(dá)及Western Blot蛋白印跡方法檢測(cè)p-JNK、JNK、p-c-jun和c-jun蛋白的表達(dá)。同時(shí)下腔靜脈采血檢測(cè)血漿ALT、AST水平。
　　結(jié)果：與對(duì)照組相比,+10Gz組、SP600125組大鼠血漿谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶明顯增高（P<0.05),而與+10Gz組相比,SP600125組血漿ALT、AST明顯下降（P<0.05)。與對(duì)照組相比,+10Gz組、SP600125組c-jun mRNA的表達(dá)水平均明

9、顯升高(P<0.05),而與+10Gz組相比,SP600125組肝臟細(xì)胞c-jun mRNA的表達(dá)明顯下降（P<0.05)。與對(duì)照組比較,+10Gz組和SP600125組p-c-jun、c-jun和p-JNK蛋白表達(dá)水平明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。而與+10Gz組相比,SP600125組p-c-jun、c-jun和p-JNK蛋白表達(dá)水平均明顯下降（P<0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。各組JNK蛋白表達(dá)水平比較,結(jié)果顯示各組