細(xì)胞應(yīng)激效應(yīng)及其分子機(jī)制的初步研究.pdf

1、細(xì)胞應(yīng)激效應(yīng)及其分子機(jī)制的初步研究應(yīng)激可以嚴(yán)重干擾細(xì)胞的正常的生命活動.高溫和紫外線日常生活中兩種最常見的物理刺激,本論文主要研究了高溫和紫外照射對細(xì)胞生命活動包括細(xì)胞周期及凋亡的影響.第一部分熱應(yīng)激細(xì)胞效應(yīng)的基本特征1熱休克對A549細(xì)胞周期的影響42℃×1小時熱休克處理可以引起A549細(xì)胞周期產(chǎn)生兩種阻滯,一個在G1期,另一個在G2/M期.產(chǎn)生這兩種不同的阻滯結(jié)果可能是因?yàn)闊嵝菘藭r細(xì)胞所處的細(xì)胞周期時相不同.2熱休克對Jurkat細(xì)

2、胞周期的影響相同條件的熱休克處理對Jurkat細(xì)胞周期的影響與A549細(xì)胞不同.3熱休克對G1期同步化A549細(xì)胞的影響4熱休克對細(xì)胞凋亡的影響5熱休克引起的細(xì)胞周期阻滯的機(jī)制第二部分Hsp90特異性抑制劑geldanamycin(GA)對細(xì)胞周期的影響1熱休克細(xì)胞中hsp90α、hsp90β mRNA表達(dá)增加應(yīng)用競爭性RT-PCR技術(shù)檢測熱休克處理的Jurkat細(xì)胞中hsp90α和hsp90β mRNA水平的變化,發(fā)現(xiàn)熱休克后兩種mR

3、NA顯著增加.說明熱休克對hsp90α和hsp90b有很強(qiáng)的誘導(dǎo)作用.2GA對細(xì)胞周期的影響在正常培養(yǎng)條件下GA對Jurkat細(xì)胞和A549細(xì)胞周期的運(yùn)行有明顯的阻滯作用并可誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡.3 Hsp90對細(xì)胞維持正常生命活動至關(guān)重要在熱休克和非熱休克條件下用GA處理A549細(xì)胞,培養(yǎng)48小時后,發(fā)現(xiàn)無論是否受到熱休克處理細(xì)胞均發(fā)生明顯的形態(tài)學(xué)改變.第三部分UVC對細(xì)胞周期與凋亡的影響1 UVC對Jurkat細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)2 UVC對

4、A549細(xì)胞周期及凋亡的影響第四部分hsp90β基因第一外顯子中非典型p53結(jié)合位點(diǎn)對hsp90β啟動子活性的影響通過競爭性RT-PCR技術(shù)檢測了hsp90β基因第一外顯子中非典型p53結(jié)合位點(diǎn)在熱休克和UVC照射后對hsp90β啟動子活性的影響,發(fā)現(xiàn)該位點(diǎn)無論在組成性狀態(tài)下還是應(yīng)激條件下均可增加hsp90β啟動子活性,該位點(diǎn)突變后,hsp90β啟動子活性明顯降低.在此實(shí)驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)熱休克可以誘導(dǎo)hsp90β基因啟動子活性,而UVC照射后