姜黃素對INS-1細(xì)胞氧化應(yīng)激和胰島素分泌的影響及其分子機(jī)制初步研究.pdf

1、研究背景:
　　糖尿病(DiabetesMellitus,DM)是一組以血糖水平升高為特征的慢性代謝性疾病,可引起神經(jīng)、腎臟、視網(wǎng)膜、心腦血管等多種并發(fā)癥,嚴(yán)重影響著患者的生活質(zhì)量[1-5]。多種研究發(fā)現(xiàn),氧化應(yīng)激(OxidativeStress,OS)在糖尿病的發(fā)生發(fā)展中起著舉足輕重的作用,機(jī)體氧化還原水平的失衡是糖尿病發(fā)生的病理生理學(xué)基礎(chǔ)[6-7]。新近發(fā)現(xiàn)表明,Fen1(flapendonuclease1,瓣?duì)詈怂醿?nèi)切酶1)

2、在改善真核細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷中發(fā)揮了極其重要的作用[8-9]。姜黃素(Curcumin)作為姜黃色素發(fā)揮作用最重要的活性成分,已被諸多研究報(bào)道具有抗炎、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)等廣泛的藥理學(xué)作用,在治療糖尿病及其并發(fā)癥方面有著廣闊的應(yīng)用前景。但其發(fā)揮抗氧化作用的分子生物學(xué)機(jī)制尚未完全明了,特別是姜黃素抗氧化的機(jī)制是否與調(diào)節(jié)Fen1的表達(dá)有關(guān)目前尚無報(bào)告[10-14]。為此,針對該問題我們從細(xì)胞水平上進(jìn)行了系列的研究,在觀察姜黃素對INS-1細(xì)胞氧

3、化水平和胰島素分泌影響的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步觀察了INS-1細(xì)胞在氧化應(yīng)激狀態(tài)和姜黃素處理情況下Fen1和ERK1/2(extracellularregulatedproteinkinases,細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶)磷酸化表達(dá)的變化,旨在細(xì)胞水平上為姜黃素治療糖尿病提供新的分子機(jī)制。研究方法:
　　將INS-1細(xì)胞作為本實(shí)驗(yàn)的研究對象,INS-1細(xì)胞氧化應(yīng)激模型采用強(qiáng)氧化劑H2O2誘導(dǎo)。將INS-1細(xì)胞分為陰性對照組,模型組(H2O2處理

4、),干預(yù)組(5,7,10μM姜黃素+H2O2處理)。采用CCK-8檢測細(xì)胞增殖,分光光度計(jì)法檢測細(xì)胞丙二醛(MDA)、還原型谷胱甘肽(GSH)水平,酶標(biāo)儀檢測細(xì)胞內(nèi)活性氧(Reactiveoxygenspecies,ROS)的改變,放射免疫法檢測細(xì)胞上清液中胰島素分泌量,免疫印跡試驗(yàn)檢測FEN1,p-ERK1/2蛋白表達(dá)的水平。
　　研究結(jié)果:
　　1.與陰性對照組相比,模型組MDA,ROS值明顯升高(P<0.05),GSH

5、明顯降低(P<0.05);與模型組相比,干預(yù)組MDA,ROS值明顯降低(P<0.05),GSH明顯升高(P<0.05)。
　　2.與陰性對照組相比,模型組的胰島素分泌水平明顯降低(P<0.05);與模型組相比,10μM姜黃素處理組的胰島素分泌水平明顯升高(p<0.05)。
　　3.與模型組比較,10μM的姜黃素處理能顯著提高INS-1細(xì)胞FEN1蛋白的表達(dá)和ERK1/2的磷酸化水平,U0126(ERK1/2特異性的抑制劑)可