EPCs動員和ERK-CREB信號通路對AMI大鼠心肌血管新生的影響以及奧美沙坦酯的干預.pdf

1、目的：通過急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)大鼠模型觀察奧美沙坦酯對血壓、外周血血管內(nèi)皮生長因子(vascularendothelium growth factor，VEGF)水平、外周血內(nèi)皮祖細胞(endothelialprogenitor cells，EPCs)數(shù)量、骨髓EPCs數(shù)量、心肌微血管密度、心肌梗死面積和心肌磷酸化胞外信號調(diào)節(jié)激酶(phosphorylatableextracel

2、lular signal-regulated kinases，p-ERK)蛋白及磷酸化cAMP反應元件結(jié)合蛋白(phosphorylatable cAMP response element binding protein，p-CREB)表達的影響效應，旨在研究EPCs動員和ERK/CREB信號通路對AMI大鼠心肌血管新生的影響以及奧美沙坦酯的干預。 方法： (1)大鼠心肌梗死模型建立和實驗分組： 結(jié)扎Spragu

3、e-Dawley大鼠冠狀動脈左前降支建立心肌梗死模型，將術后24h存活的24只大鼠隨機分為三組：急性心肌梗死組(AMI組)(n=8)；OML組(n=8)，奧美沙坦酯給藥劑量為1mg/kg/d；OMH組(n=8)，奧美沙坦酯給藥劑量為3mg/kg/d。共給藥2周。另設一假手術組(Sham組)(n=8)。將奧美沙坦酯研碎溶于助溶劑配成藥液，術后24h開始一天一次灌胃，Sham組及AMI組均以同樣方法喂予等體積助溶劑。 (2)觀察指標

4、： ①尾動脈血壓：分別于術前、術后24小時(灌胃前)、1w、2w測量； ②血清VEGF含量：術后2w經(jīng)眼眶后靜脈叢取外周血，采用酶聯(lián)免疫吸附測定法(Enzyme Linked-Immuno-absorbent Assay,ELISA)測定； ③外周血循環(huán)及骨髓EPCs計數(shù)：分別于術后1w經(jīng)眼眶后靜脈叢、術后2w經(jīng)心臟穿刺取外周血，術后2w取骨髓，經(jīng)分離、原代培養(yǎng)和DiI標記的乙?；兔芏戎鞍?1，1′-dioc

5、tadecyl-3，3，3′，3′- tetramethylindo-carbocyanineperchlorate labeled acetylated Low Density Lipoprotein，DiI-acLDL)及FITC標記的單葉豆凝集素1(fluorescein isothiocyanate -conjugatedBandeiraea simplicifolia-1 lectin，F(xiàn)ITC-BS-1)雙色熒光標記鑒定后進

6、行； ④心臟組織病理改變及心肌梗死面積測算：處死動物后做左室橫切面石蠟切片，通過HE染色測算心臟瘢痕長度占左室總周長的百分比，以此百分比代表心肌梗死面積； ⑤心肌微血管計數(shù)：以Ⅷ因子相關抗原抗體做內(nèi)皮細胞免疫組化染色進行； ⑥心肌p-ERK及p-CREB的表達：采用免疫組化染色方法檢測。 結(jié)果： (1)尾動脈收縮壓：在術前、術后24h、1w及2w各組大鼠尾動脈收縮壓之間無明顯差異； (2)

7、血清VEGF：與Sham組相比，AMI組、OML組和OMH組血清VEGF含量均明顯升高，差異有顯著性；與AMI組相比，OML組和OMH組血清VEGF含量有降低趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義； (3)外周循環(huán)EPCs數(shù)量：Sham組術后1w、2w循環(huán)EPCs數(shù)量差異無顯著性；AMI組術后第1w循環(huán)EPCs數(shù)量較第2w稍高，差異無顯著性；OML組、OMH組術后2w循環(huán)EPCs數(shù)量均較1w高，差異有顯著性；AMI組與Sham組同期相比，循環(huán)

8、EPCs數(shù)量均明顯增加，差異有顯著性。OML組、OMH組與同期AMI組相比，循環(huán)EPCs數(shù)量亦明顯增加，差異均有顯著性，且奧美沙坦酯呈劑量依賴性增加循環(huán)EPCs數(shù)量，OML組和OMH組同期EPCs數(shù)量差異顯著。 (4)骨髓EPCs數(shù)量：術后2w，AMI組骨髓EPCs數(shù)量較Sham組明顯增多，差異有顯著性；OML組骨髓EPCs數(shù)量比AMI組明顯增加；OMH組骨髓EPCs數(shù)量較AMI組亦明顯增加，且奧美沙坦酯呈劑量依賴性增加骨髓EP

9、Cs數(shù)量； (5)心臟HE染色及心肌梗死面積：Sham組心肌HE染色正常；AMI組及奧美沙坦酯治療組梗死區(qū)均可見心肌纖維溶解斷裂，大量炎性細胞、成纖維細胞浸潤，瘢痕組織形成，非梗死區(qū)心肌纖維排列整齊。奧美沙坦酯呈劑量依賴性縮小心肌梗死面積； (6)心肌微血管密度：術后2周，AMI組心肌微血管密度較Sham組明顯增加，兩者差異顯著；奧美沙坦酯呈劑量依賴性增加心肌微血管密度； (7)心肌p-ERK及p-CREB蛋白表

10、達：p-ERK和p-CREB的表達在Sham組極低；在AMI組其表達明顯增加；奧美沙坦酯呈劑量依賴性降低該表達。 結(jié)論： (1)AMI大鼠心肌血管新生增多，乃機體對缺血損傷的一種“生理性”保護反應，但并不能阻止AMI病程的進展； (2)AMI后大鼠心肌血管新生增多，與血清VEGF水平升高和EPCs動員增加有關； (3)AMI后心肌p-ERK和p-CREB蛋白表達水平增加，表明此時ERK/CREB通路明顯活

11、化，可能促進了心肌血管新生； (4)奧美沙坦酯能夠促進AMI后心肌血管新生，縮小心肌梗死面積，其機制可能與奧美沙坦酯增加骨髓EPCs動員有關； (5)奧美沙坦酯可降低AMI大鼠心肌p-ERK及p-CREB的表達，提示奧美沙坦酯通過抑制AT1R而抑制ERK/CREB通路的活化，其效應與心肌血管新生之間關系如何，尚需進一步深入研究； (6)奧美沙坦酯促進AMI大鼠心肌血管新生的作用獨立于降低血壓效應和VEGF途徑之外