人源性益生菌降膽固醇機(jī)制及影響因素研究.pdf

1、目前，心腦血管疾病已成為許多國(guó)家居民的首要死因，而引發(fā)心腦血管疾病的重要原因之一就是高膽固醇血癥。藥物治療一直是臨床處理高膽固醇血癥的主要方式，然而降膽固醇藥物往往存在著一定的副作用。益生菌是一類能夠?qū)θ梭w健康起到促進(jìn)作用的活體微生物，通常具有較高的安全性，因此使用益生菌預(yù)防和治療高膽固醇血癥具有重要意義。在本研究中，從27份人類糞便樣品中分離出了150株乳酸菌，以該150株乳酸菌為受試菌株，對(duì)潛在的降膽固醇益生菌進(jìn)行了篩選，同時(shí)并對(duì)篩

2、選出的菌株的體外降膽固醇的機(jī)制、功能特性的影響因素及體內(nèi)降膽固醇功能等進(jìn)行了研究。
　　基于膽鹽解離途徑對(duì)潛在的降膽固醇益生菌進(jìn)行了篩選，最終篩選出干酪乳桿菌F0822、干酪乳桿菌F0422、屎腸球菌F0511和屎腸球菌IN7.12等4株乳酸菌；基于DCA脫除途徑對(duì)潛在的降膽固醇益生菌進(jìn)行了篩選，干酪乳桿菌F0822被最終篩選出來。干酪乳桿菌F0822是同時(shí)具有較強(qiáng)膽鹽解離能力和脫氧膽酸（DCA）脫除能力的潛在降膽固醇益生菌。

3、r>　　對(duì)上述4株乳酸菌的膽鹽解離特性進(jìn)行了研究，獲得了如下發(fā)現(xiàn)：⑴膽鹽直接影響菌株膽鹽水解酶（BSH）的分布。在無膽鹽的培養(yǎng)條件下，上述4株乳酸菌的BSH幾乎全部集中在細(xì)胞內(nèi)，而在含膽鹽的培養(yǎng)條件下，胞內(nèi)的BSH有部分轉(zhuǎn)移到了細(xì)胞外；⑵細(xì)菌細(xì)胞膜阻礙了胞內(nèi)的BSH對(duì)底物膽鹽的解離作用，因而裂解細(xì)胞比活細(xì)胞具有更強(qiáng)的膽鹽解離能力；⑶干酪乳桿菌F0822和干酪乳桿菌F0422活細(xì)胞對(duì)甘氨酸結(jié)合膽鹽具有較強(qiáng)的解離能力，而屎腸球菌F0511和

4、屎腸球菌IN7.12則對(duì)牛磺酸結(jié)合膽鹽具有較強(qiáng)的解離能力。
　　對(duì)干酪乳桿菌F0822脫除DCA的機(jī)制進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)干酪乳桿菌F0822脫除DCA的機(jī)制應(yīng)該主要?dú)w結(jié)為細(xì)胞壁的S層蛋白對(duì)DCA的吸附作用。該S層蛋白對(duì)DCA的吸附作用是在疏水作用推動(dòng)作用下發(fā)生的氫鍵吸附。DCA的羧基是吸附在S層蛋白上的主要基團(tuán)。采用現(xiàn)代儀器手段對(duì)該S層蛋白的理化特性進(jìn)行了表征，發(fā)現(xiàn)該S層蛋白的分子量為43 kDa、等電點(diǎn)為9.7、熱變性溫度為78℃

5、，含40.8％的疏水性氨基酸，不含半胱氨酸。
　　在體外研究了吐溫80對(duì)干酪乳桿菌 F0822和干酪乳桿菌 F0422功能特性的影響，發(fā)現(xiàn)0.2%（v/v）的吐溫80能顯著（P<0.05）增強(qiáng)兩株干酪乳桿菌的膽鹽解離能力和膽鹽耐受能力。吐溫80增強(qiáng)該兩株菌膽鹽解離能力的機(jī)制與吐溫80增強(qiáng)菌株胞外的BSH的活性有關(guān)，而吐溫80增強(qiáng)該兩株菌膽鹽耐受能力的途徑與吐溫80降低菌株胞內(nèi)物質(zhì)泄漏程度和增加菌株細(xì)胞內(nèi)16:0游離脂肪酸的含量有關(guān)

6、。
　　在體外研究了氯化鈣對(duì)干酪乳桿菌F0822和干酪乳桿菌F0422功能特性的影響，發(fā)現(xiàn)0.3%（m/v）的氯化鈣能顯著（P<0.05）增強(qiáng)該兩株菌的黏附能力。對(duì)于干酪乳桿菌F0822，氯化鈣增強(qiáng)菌株黏附能力的途徑與鈣離子介導(dǎo)S層蛋白與上皮細(xì)胞間的黏附作用有關(guān)；而對(duì)于干酪乳桿菌 F0422，氯化鈣增強(qiáng)菌株黏附能力的途徑與鈣離子介導(dǎo)脂磷壁酸與上皮細(xì)胞間的黏附作用有關(guān)。
　　采用大鼠對(duì)干酪乳桿菌F0822和干酪乳桿菌F0422

7、的體內(nèi)降膽固醇功能進(jìn)行了評(píng)價(jià)，發(fā)現(xiàn)干酪乳桿菌F0822在低劑量（1×108 CFU/mL飲用水）下就能顯著（P<0.05）降低大鼠血清TC、LDL-C及肝臟TC水平，而干酪乳桿菌F0422只有在高劑量（1×109 CFU/mL飲用水）下才能發(fā)揮如此作用。增加大鼠每日糞便中總膽汁酸的排泄量是該兩株菌在體內(nèi)發(fā)揮降膽固醇功能的主要機(jī)制。
　　在大鼠體內(nèi)研究了0.6%（v/v）吐溫80和0.1%氯化鈣（m/v）的混合物對(duì)干酪乳桿菌F082