高壓氧促進HIBD新生大鼠人神經(jīng)干細胞移植療效的實驗研究.pdf

1、目的：通過經(jīng)腦室移植人神經(jīng)干細胞(human neural stemcells，hNSCs)配合高壓氧(hyperbaric oxygenation，HBO)治療，觀察HBO對植入的hNSCs存活、遷移、分化的影響。 方法：利用7日齡(d7)Wistar大鼠采用Rice法復(fù)制HIBD模型，并隨機分為HIBD組(n=20)、移植組(n=24)、HBO組(n=20)和移植+HBO組(n=24)。利用體外培養(yǎng)的方法制備hNSCs單細胞

2、懸液，d10時采用側(cè)腦室微量注射法進行hNSCs移植，于移植后15分鐘內(nèi)開始HBO治療，每日1次，連續(xù)10d。于d11，d12，d13，d20時利用原位缺口末端染色法(TUNEL法)進行皮質(zhì)和海馬區(qū)凋亡細胞計數(shù)。d20行病理檢查，并應(yīng)用免疫熒光組化染色法檢測移植組和移植+HBO組植入細胞存活、遷移、分化情況。 結(jié)果： 1．胎兒腦組織體外培養(yǎng)12天可獲得hNSCs球，免疫熒光標記顯示為Nestin陽性細胞，經(jīng)誘導(dǎo)分化后NF

3、、GFAP染色呈陽性，提示其具有NSCs特性。 2．TUNEL陽性細胞計數(shù)：d11時各組大鼠腦組織皮層和海馬區(qū)均可檢測到凋亡細胞，與HIBD組比較，HBO組TUNEL陽性細胞數(shù)的差異不具有顯著性，而移植組和移植+HBO組的TUNEL陽性細胞減少，差異具有顯著性(均P(0.01)；移植組和移植+HBO組兩組間比較差異也具有顯著性(P<0.01)。d20時，與HIBD組比較，HBO組、移植組和移植+HBO組的TUNEL陽性細胞減少，

4、差異均具有顯著性(均P(0.01)，移植組和移植+HBO組兩組間比較差異也具有顯著性(P<0.01)。3.d20時免疫熒光染色結(jié)果顯示植入細胞從側(cè)腦室向周圍腦實質(zhì)廣泛遷移，分布在腦室旁、腦白質(zhì)通路、丘腦、皮層及海馬等處，在遷移方式與分布上，移植組和移植+HBO組無明顯差異，但移植+HBO組植入細胞的存活數(shù)量高于移植組，其差異具有顯著性(P(0.01)；兩組均可檢測到hNSCs分化形成的神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細胞和未分化的hNSCs，細胞形態(tài)與