遹肺飲及其拆方對急性肺損傷后肺纖維化大鼠模型Smad2-3表達影響研究.pdf

1、目的:基于急性肺損傷后肺纖維化臨床和實驗研究，結合“肺氣主降，肺體喜潤”的生理特性，提出該病以肺之氣陰兩虛為本，血瘀為標的觀點。通過實驗觀察遹肺飲及其拆方對急性肺損傷后肺纖維化大鼠模型Smad2/3表達的影響，依據(jù)“以方測證”理論，揭示及完善急性肺損傷后肺纖維化的病機變化，為制定急性肺損傷后肺纖維化規(guī)范的中醫(yī)辨證分型標準、療效評定體系準確量化及選方用藥標準提供建議，以便客觀地評定效果。
　　方法:實驗采用博萊霉素-A5(BLM-A

2、5)氣管滴注法誘發(fā)急性肺損傷(ALI)后特發(fā)性肺纖維化(IPF) SD大鼠模型。108只大鼠隨機分為對照組、模型組、補氣通絡組、養(yǎng)陰通絡組、祛瘀通絡組、遹肺飲組。對照組及模型組均灌服生理鹽水10ml/kg，補氣通絡組灌服補氣通絡方混懸液，5.2 g/kg體重;養(yǎng)陰通絡組灌服養(yǎng)陰通絡方混懸液，5.1g/kg體重;祛瘀通絡組灌服祛瘀通絡方混懸液，5.3 g/kg體重;遹肺飲組灌服遹肺飲方混懸液12.4 g/kg體重;各組均每日1次灌胃。通過

3、每日觀察大鼠的體重、飲食情況、精神狀態(tài)、反應情況、外觀表征和糞便情況等進行觀測，確定急性肺損傷后肺纖維化大鼠模型建立成功。造模后分別在第7天、第14天、第28天三個時間段將6組大鼠各隨機抓取6只進行麻醉，股動脈取血;右下肺組織置于4％中性甲醛固定，做石蠟切片，行HE與Masson染色、免疫組化染色;剩余組織液氮速凍，-70℃保存?zhèn)溆茫M行Western-blot。
　　結果:
　　1.HE染色結果顯示:空白對照組肺組織結構清

4、晰，肺泡腔透亮，肺泡壁未見增厚，肺泡上皮細胞結構完整，肺間質未見膠原沉積。模型組隨著時間的延長，其肺泡炎和肺泡纖維化程度明顯升高，7天時部分肺泡和毛細血管狹窄甚閉合，致肺組織實性改變，肺泡腔可見大量活化巨噬細胞，中性粒細胞、淋巴細胞少見，肺間質內則出現(xiàn)大量的巨噬細胞及淋巴細胞炎性浸潤;14天時肺泡炎持續(xù)，炎性細胞浸潤亦較明顯，部分肺泡結構消失，成纖維細胞增多并可見纖維組織增生，少量膠原沉積;28天時肺泡結構萎陷，成纖維細胞大量增生，纖維

5、組織占據(jù)肺泡間隔及部分肺泡腔呈條索樣瘢痕改變，斑片狀分布。
　　2.Masson染色結果顯示:空白對照組在氣管及血管壁周圍可見少量藍色的膠原纖維沉積。模型組第7天時肺泡間隔及間質內有成纖維細胞，多集中在血管、小及細小支氣管周圍，并可見少量藍色膠原纖維沉積;第14天時肺泡間隔明顯增寬，肺血管、氣道壁、肺泡間隔及間質內膠原纖維沉積明顯增加;第28天時肺間質沉積大片狀或條索狀的膠原纖維，肺泡融合及實變，典型的肺纖維化改變。
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6、.免疫組化及Western-blot結果顯示:肺組織中Smad2/3和TGF-β在第14和28天均持續(xù)高表達，且第14天表達最高。
　　4.對急性肺損傷后肺纖維化模型大鼠給予藥物干預后，補氣通絡組、養(yǎng)陰通絡組、祛瘀通絡組、遹肺飲組大鼠仍存在肺纖維化病理形態(tài)學的逐步進展性改變，但程度明顯輕于模型組。肺組織中Smad2/3和TGF-β1表達的趨勢與模型組類似，但其含量均高于空白對照組而低于模型組(P＜0.05)。
　　結論: