針?biāo)幗Y(jié)合對實驗性乳腺增生大鼠血管（VEGF、bFGF）生成的影響.pdf

1、目的：女性的生理活動受到自身機體內(nèi)分泌的調(diào)節(jié)。傳統(tǒng)理論認(rèn)為乳腺增生病與內(nèi)分泌失調(diào)有關(guān)。乳腺增生病作為一種良性病變，它是育齡期婦女的常見病，多發(fā)病，發(fā)病率占全部乳房疾病的74.1％，且有逐年上升的趨勢，其患病人群乳腺癌發(fā)生率較普通人群高2～3倍，因此積極治療乳腺增生病，對預(yù)防其發(fā)生癌變、提高婦女生活質(zhì)量具有重要意義。目前，西醫(yī)對本病尚缺乏令人滿意的治療措施，其內(nèi)分泌療法副作用較大，長期使用可干擾體內(nèi)激素的平衡，不宜作為常規(guī)用藥。本課題在臨

2、床已經(jīng)證實針灸和中藥治療乳腺增生病有效的基礎(chǔ)上，通過復(fù)制乳腺增生的大鼠模型，采用針?biāo)幗Y(jié)合的治療方法，與單純服用中藥、單純應(yīng)用針灸以及西藥三苯氧胺(TAM)相比較，觀察其療效；并通過分析模型大鼠血清和乳腺組織中細(xì)胞因子的變化與乳腺組織增生的相關(guān)性，揭示乳腺增生病從微血管生成方面的部分發(fā)病機理，并探討針?biāo)幗Y(jié)合對其的干預(yù)調(diào)節(jié)作用，豐富和發(fā)展中醫(yī)治療學(xué)。 方法：選用健康清潔級雌性Wistar大鼠60 只，75～85日齡，體重220+20

3、g，按照隨機數(shù)字表法將其分為6組，每組10只：即正常對照組(簡稱“正常組”)、模型對照組(簡稱“模型組”)、模型+針刺組(簡稱“針刺組”)、模型+中藥組(簡稱“中藥組”)、模型+針刺+中藥組(簡稱“針?biāo)幗M”)、模型+TAM陽性對照組(簡稱"對照組")。除正常組大鼠常規(guī)喂養(yǎng)外，其余組參照張璐等造模方法，大鼠腹腔注射苯甲酸雌二醇0.5mg/kg/日，連續(xù)25天，然后注射黃體酮5mg/kg/日，連續(xù)5天，建立大鼠乳腺增生的模型。從第31天開始

4、，各組分組治療。針刺組：造模后，根據(jù)《中國獸醫(yī)針灸學(xué)》，結(jié)合人體穴位，選取"屋翳"、"合谷"、"膻中"、"足三里"，行捻轉(zhuǎn)手法，每日治療1次，9次為一療程，療程間休息1天，治療三個療程，共30日。中藥組：造模后，按25g/kg/日灌服中藥，30日。針?biāo)幗M：造模后，針刺操作同針刺組，同時灌服中藥，劑量同中藥組，干預(yù)30日。對照組：造模后，給予三苯氧胺1.8mg/kg/日，相當(dāng)于臨床等效劑量，干預(yù)30日。正常組和模型組灌服同體積的蒸餾水，3

5、0日。末次針灸給藥5小時后，游標(biāo)卡尺測量第2對乳房的直徑。斷頭取血，制備血清。放射免疫法測定血清生殖激素雌二醇(E2)、孕酮(P)和催乳素(PRL)的含量。酶聯(lián)免疫法測定血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)和堿性成纖維細(xì)胞生成因子(bFGF)的含量。無菌操作楔形取下大鼠第3對乳房，用4％的多聚甲醛溶液固定，石蠟包埋切片，常規(guī)旺染色，在光鏡下進(jìn)行組織形態(tài)學(xué)觀察。同法取下大鼠的第5對乳房組織，運用免疫組化法觀察VEGF和bFGF的表達(dá)。 結(jié)

6、果： 1、大鼠乳頭直徑的變化與正常組相比，模型組大鼠乳頭直徑明顯增大，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。經(jīng)治療后，針刺組、中藥組乳頭直徑減小，與模型組相比有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；對照組和針?biāo)幗M乳頭直徑明顯減小，與模型組相比有顯著性差異(P<0.01)。 2、血清生殖激素結(jié)果與正常組相比，模型組大鼠血清中E2的含量明顯升高(P<0.01)。經(jīng)治療后，針刺組、中藥組含量均降低，與模型組比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)

7、；對照組和針?biāo)幗ME<,2>含量明顯降低，與模型組比較有顯著性差異(P<0.01)。 與正常組相比，模型組大鼠血清中P的含量明顯降低(P<0.01)。經(jīng)治療后，針刺組、中藥組和對照組含量均有升高的趨勢，但與模型組比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；針?biāo)幗M含量明顯升高，與模型組比較有顯著性差異(P<0.01)。 與正常組相比，模型組大鼠血清中PRL的含量升高，有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。經(jīng)治療后，針刺組、中藥組和對照組PRL

8、的含量均有降低的趨勢，但與模型組比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；針?biāo)幗M含量降低，與模型組比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。 3、血清VEGF、bFGF的變化與正常組相比，模型組大鼠血清中VEGF的含量明顯升高(P<0.01)。經(jīng)治療后，針刺組、中藥組含量均有降低的趨勢，但與模型組比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；與模型組比較，針?biāo)幗M、對照組血清VEGF含量均降低，其差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01，P<0.05)。 與

9、正常組相比，模型組大鼠血清中bFGF的含量明顯升高(P<0.01)。經(jīng)治療后，針刺組有降低的趨勢，但與模型組比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；中藥組、對照組和針?biāo)幗M血清bFGF含量均降低，與模型組比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05，P<0.01，P<0.01)。 4、乳腺組織VEGF、bFGF的表達(dá) 4.1乳腺組織VEGF的表達(dá)情況VEGF的陽性表達(dá)定位于細(xì)胞漿內(nèi)，為棕黃色染色。與正常組相比，模型組大鼠乳腺組織中VEGF的表

10、達(dá)增強(P<0.01)。經(jīng)治療后，針刺組、中藥組和針?biāo)幗MVEGF的表達(dá)均明顯低于模型組，且與模型組比較有顯著性差異(均P<0.01)；對照組與模型組比較有降低的趨勢，但兩組之間比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。 4.2乳腺組織bFGF的表達(dá)情況bFGF的陽性表達(dá)定位于細(xì)胞漿內(nèi)，為棕黃色染色。與正常組相比，模型組大鼠乳腺組織中bFGF的表達(dá)增強(P<0.01)。經(jīng)治療后，針刺組、中藥組和針?biāo)幗MbFGF的表達(dá)均明顯低于模型組，且與模

11、型組比較有顯著性差異(均P<0.01)；對照組與模型組比較有降低的趨勢，但兩組之間比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。 結(jié)論： 1、乳腺增生模型大鼠乳頭直徑明顯增大，血清中E<,2>和PRL的含量較正常組升高，P的含量較正常組降低，提示生殖激素的內(nèi)分泌紊亂是導(dǎo)致乳腺增生發(fā)生的重要因素。與臨床相符，提示模型復(fù)制成功。 2、乳腺增生模型大鼠血清中VEGF和bFGF的含量較正常組升高，在局部的乳腺組織中亦存在著表達(dá)活性的