臨床感染患者陰溝腸桿菌對(duì)抗菌藥物敏感性分析及其耐藥機(jī)制研究.pdf

1、目的：調(diào)查醫(yī)院臨床感染患者分離的陰溝腸桿菌對(duì)各類抗菌藥物的敏感性，了解不同耐藥基因的分布情況，分析其耐藥機(jī)制和耐藥菌株的傳播途徑及醫(yī)院內(nèi)感染的分子流行病學(xué)特征，指導(dǎo)臨床有效控制耐藥菌株在醫(yī)院內(nèi)的傳播。
　　方法：收集2008年1月至2011年6月天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院臨床感染患者分離的非重復(fù)陰溝腸桿菌114株，應(yīng)用Vitek-2 compact系統(tǒng)及微量肉湯稀釋法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，采用改良三維試驗(yàn)、超廣譜β-內(nèi)酰胺酶確證試驗(yàn)、改良Hodg

2、e試驗(yàn)、美羅培南改良三維試驗(yàn)、EDTA協(xié)同試驗(yàn)初篩β-內(nèi)酰胺酶；降落PCR分別檢測(cè)四組β-內(nèi)酰胺酶(AmpC酶、ESBLs、OXA類碳青霉烯酶、A、B類碳青霉烯酶)和Ⅰ類、Ⅱ類整合子基因；單一PCR檢測(cè)CTX-M基因上游插入序列ISEcpl和aac(6’)-Ib基因。對(duì)整合子基因陽性菌株同時(shí)進(jìn)行整合子可變區(qū)的擴(kuò)增，并測(cè)序分析整合子可變區(qū)攜帶的耐藥基因盒；質(zhì)粒接合試驗(yàn)檢測(cè)耐藥基因的傳播性；應(yīng)用腸桿菌科重復(fù)一致序列(ERIC)方法對(duì)產(chǎn)酶菌株

3、進(jìn)行分子流行病學(xué)研究，確定耐藥菌株間的親緣關(guān)系。
　　結(jié)果：1、藥敏結(jié)果114株陰溝腸桿菌對(duì)所測(cè)試的15種抗菌藥物體外耐藥現(xiàn)象較嚴(yán)重。對(duì)亞胺培南、美羅培南敏感率最高(100％)，其次為厄他培南和阿米卡星(97.4%)；對(duì)頭孢菌素類藥物的耐藥性以頭孢西丁最高(100%)，其次為頭孢噻肟(45.6%)。
　　2、表型檢測(cè)結(jié)果頭孢西丁改良三維試驗(yàn)陽性檢測(cè)AmpC酶陰溝腸桿菌株53株(46.5%)；雙紙片擴(kuò)散法檢測(cè)ESBLs陽性菌株

4、17株(14.9%)；改良Hodge試驗(yàn)檢測(cè)碳青霉烯酶陽性菌株6株(5.3%)；美羅培南改良三維試驗(yàn)檢測(cè)產(chǎn)酶菌株14株(12.3%)；美羅培南-EDTA協(xié)同試驗(yàn)未檢出產(chǎn)酶菌株。
　　3、降落PCR試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果①β-內(nèi)酰胺酶基因檢測(cè)結(jié)果陰溝腸桿菌攜帶AmpC酶基因47株(41.2%)，并以MIR型(40/47)為主，其次為DHA型(12/47)，未檢測(cè)出來CIT型、FOX型、MOX型和ACC型AmpC酶；陰溝腸桿菌攜帶廣譜β-內(nèi)酰胺

5、酶基因34株(29.8%)，其中陰溝腸桿菌ESBLs檢出率為52.9%(18/34)，且以blaCTX-M基因(16/18)為主，在該基因上游均檢測(cè)到ISEcpl；此外，2株陰溝腸桿菌攜帶blaOXA-1ESBLs基因，且該基因上游ISEcpl檢測(cè)呈陰性；非ESBLs基因以TEM型(27/34)為主，2株菌產(chǎn)SHV型(2/34)廣譜β-內(nèi)酰胺酶；未檢出碳青霉烯酶基因；②整合子檢測(cè)結(jié)果26株(22.8%)陰溝腸桿菌Ⅰ類整合子(intI1)

6、檢測(cè)陽性，其中23株擴(kuò)增出整合子可變區(qū)，3株未檢出可變區(qū)；共檢出2種整合子可變區(qū)：700 bp2株，1000 bp21株，經(jīng)測(cè)序比對(duì)證實(shí)攜帶4種耐藥基因盒，709 bp可變區(qū)攜帶耐藥基因盒dfrA15，1087bp18株攜帶耐藥基因盒aadB-aadA2，1009bp3株攜帶耐藥基因盒aadA1；未檢出Ⅱ類整合子基因(intI2)；③6株陰溝腸桿菌攜帶aac(6’)-Ib基因。
　　4、測(cè)序比對(duì)結(jié)果blaMIR、blaDHA、bl

7、aCTX-M、blaOXA-1、blaTEM、blaSHV、aac(6’)-Ib分別為blaMIR-3、blaDHA-1、blaCTX-M-3/14、blaOXA-1、blaTEM-1、blaSHV-11和aac(6’)-Ib-cr基因。
　　5、陰溝腸桿菌質(zhì)粒接合試驗(yàn)15株(15/16)CTX-M基因陽性菌株接合試驗(yàn)成功。
　　6、ERIC將63株產(chǎn)酶陰溝腸桿菌分成11個(gè)基因型，其中：A型共26株，為主要流行克隆株：B型9

8、株，C型8株，D型8株，E型2株，F(xiàn)型2株，G型2株(產(chǎn)OXA-1型ESBLs)，H型2株，I型2株，J型1株，K型1株。
　　結(jié)論：(1)本研究陰溝腸桿菌產(chǎn)酶菌株對(duì)多種抗菌藥物呈現(xiàn)耐藥現(xiàn)象；(2)耐藥表型檢測(cè)試驗(yàn)可作為菌株是否產(chǎn)酶的初篩試驗(yàn)，但仍需經(jīng)PCR確證耐藥基因的存在與否；(3)AmpC酶、廣譜β-內(nèi)酰胺酶和Ⅰ類整合子廣泛分布于臨床分離陰溝腸桿菌中；(4)陰溝腸桿菌對(duì)碳青霉烯類敏感性降低或出現(xiàn)耐藥可能與其產(chǎn)AmpC酶、ES