重組人干擾素納米磁性脂質體的構建及靶向治療人原發(fā)性肝癌的研究.pdf

1、腫瘤靶向治療是利用特定的載體將藥物在特定的導向機制作用下選擇性地定位于腫瘤組織，提高腫瘤組織內的藥物濃度，達到提高療效、降低毒副反應、增加病人順從性的目的。在本系列實驗中，采用逆相蒸發(fā)法研制了納米級磁性干擾素脂質體，考察了磁性干擾素納米脂質體的體外穩(wěn)定性、體內外磁場響應性和在原發(fā)性肝癌移植瘤裸鼠體內的生物分布，我們也進行了MIL靜注后動物的溶血性和急毒性實驗，以及用雙抗夾心ELISA法檢測各實驗組和對照組在外加磁場和不加磁場兩種狀態(tài)下，

2、藥物干預后動物的血藥濃度和組織濃度方面的藥動學研究。分別用MTT法、細胞計數法、吖啶橙染色法和DNAladder法進行細胞生長抑制和凋亡檢測。還進行了MIL靶向治療原發(fā)性肝癌移植瘤裸鼠后的分子生物學方面的機理探討。 主要研究結果如下： 1、磁性干擾素納米脂質體粒徑平均170nm，干擾素包封率62.71％，磁性顆粒均勻分布于脂質體中。不同的類脂比例、藥脂比、有機溶劑種類和油水相體積比影響磁性干擾素納米脂質體粒徑和干擾素包封

3、率。制備后4℃和-20℃保存，8h內滲漏率較低。結果提示磁性納米脂質體有可能作為干擾素的新型載體應用于惡性腫瘤的靶向治療中。 2、磁性干擾素納米脂質體體外、體內具有良好的磁場響應性。應用磁性納米脂質體加磁場的方式給藥，干擾素可以有效地聚集到靶部位，顯著提高靶部位干擾素的濃度，降低其它組織和器官中的藥物濃度。作為干擾素的有效載體，磁性納米脂質體加磁場的給藥方式有望成為腫瘤靶向治療的新途徑。 3、通過溶血實驗和急毒性實驗檢測

4、發(fā)現MIL在動物體內用藥是安全的；采用雙抗體夾心ELISA法檢測IFN組、MIL組(加磁場)和MIL組(不加磁場)在小鼠體內i.V.后血清和組織中的藥物濃度，結果發(fā)現：在MIL組(加磁場)，藥物在肝和腎內濃度明顯升高(p<0.01)，且滯留時間延長，肝和腎外各組織藥物濃度低。說明：MIL在外加磁場作用下，藥物在靶區(qū)的靶向選擇性最好，滯留時間延長：與普通IFN相比，在外加磁場的作用下，MIL改變了IFN在小鼠體內的分布特性，延長了IFN的

5、半衰期，提高了IFN的生物利用度，具有很強的靶向性和緩釋性。 4、分別用游離IFN、ML、IL和MIL對體外培養(yǎng)的Bel-7402腫瘤細胞進行藥物干預，然后再分別用MTT法、細胞計數法、吖啶橙染色法和DNAladder法進行細胞生長抑制和凋亡檢測。實驗發(fā)現：各組Bel-7402腫瘤細胞的生長受到抑制，并且出現細胞凋亡現象。各實驗組和對照組比較顯示：MIL組和IL組明顯高于游離IFN組，而游離IFN組明顯高于ML組和對照組(僅含培

6、養(yǎng)基)。以上結果均具有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。以上結果說明MIL能夠顯著抑制Bel-7402細胞的生長，其作用機制是導致細胞凋亡的發(fā)生。 5、在原發(fā)性肝癌移植瘤裸鼠腫瘤組織外固定永久磁鐵后，靜脈注射磁性干擾素納米脂質體可以顯著抑制腫瘤組織的生長，抑瘤率為62.50％，高于IFN(27.61％)和IL(28.17％)；RT-PCR顯示，MIL的VEGFmRNA表達明顯低于對照組和其它實驗組(p<0.01)，而MIL的Caspa

7、se-3mRNA表達明顯高于對照組和其它實驗組(p<0.01)；Western-blot顯示，MIL的VEGF蛋白表達明顯低于對照組和其它實驗組(p<0.01)，而MIL的Caspase-3蛋白表達明顯高于對照組和其它實驗組(p<0.01)。 本研究提示作為化療藥物的新型載體磁性納米脂質體在腫瘤部位磁場的作用下可以有效提高腫瘤組織內化療藥物濃度減低化療藥物毒副反應顯著抑制腫瘤組織的生長。本研究為磁性納米脂質體作為化療藥物載體進一