大鼠全身缺血再灌注損傷引起的腸源性膿毒癥的研究及大成湯的防治作用.pdf

1、目的：明確失血性休克發(fā)生后，腸道屏障功能破壞以及細(xì)菌、內(nèi)毒素移位狀況，觀察大鼠全身缺血再灌注損傷后腸粘膜超微結(jié)構(gòu)的改變，通過組織細(xì)菌定量、血清內(nèi)毒素含量測定，來評價中藥大成湯對阻斷腸道細(xì)菌移位、腸源性膿毒癥發(fā)生的作用，從而為臨床阻斷“休克-腸源性膿毒癥-多臟器功能衰竭(MOF)-死亡”的序貫發(fā)生提供依據(jù)，為失血性休克的綜合治療提供新的措施。 方法：將24只大鼠隨機(jī)分為3組，分別為正常組(normal group,簡稱N組)、實驗

2、組(experimental group，簡稱E組)、大成湯組(Dacheng Decoction group，簡稱D組)。實驗組及大成湯組制作急性失血性休克引起腸源性內(nèi)毒素血癥模型。正常組：股動脈穿刺置管，不放血，生理鹽水灌胃。實驗組：股動脈穿刺置管，放血并回輸，生理鹽水灌胃。大成湯組：股動脈穿刺置管，放血并回輸，大成湯煎劑灌胃。分別于血液回輸后1小時、8小時、24小時股靜脈抽血留取血樣檢測內(nèi)毒素水平。術(shù)后24小時再次10％水合氯醛腹

3、腔麻醉，無菌條件下取回腸近端腸壁組織約1立方毫米，于2分鐘內(nèi)置入4％戊二醛中前固定，用PBS充分清洗后，放入1％鋨酸中后固定，再用PBS充分清洗，酒精梯度脫水，每次10至15分鐘，再行100％丙酮脫水兩次，每次10至15分鐘，環(huán)氧樹脂812、815混合物包埋、聚合后，用Leica超薄切片機(jī)切片，厚度為50納米，醋酸鈾和檸檬酸鉛雙重電子染色，在透射電子顯微鏡下觀察、照相。無菌條件下取十二指腸中段、空腸中段、結(jié)腸中段、腸系膜淋巴結(jié)、肝臟、脾

4、臟、胰腺組織0.1克，勻漿，取0.1毫升組織勻漿接種于血培養(yǎng)皿上，37度恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)，計算菌落數(shù)并鑒定。結(jié)果1.超微結(jié)構(gòu)的變化正常組：吸收細(xì)胞呈高柱狀，胞核橢圓形，位于細(xì)胞基部，游離面的微絨毛排列整齊；細(xì)胞質(zhì)內(nèi)細(xì)胞器結(jié)構(gòu)正常；相鄰吸收細(xì)胞間的連接復(fù)合體封閉細(xì)胞間隙，固有層腺體結(jié)構(gòu)正常，僅見少量淋巴細(xì)胞浸潤。實驗組：小腸粘膜上皮吸收細(xì)胞局部游離緣形成“潰瘍”(缺損)、或形成“蘑菇云”樣突起，微絨毛局部變短、變粗、減少、缺失，微絨毛和粘膜下

5、組織形成缺損，局部細(xì)胞膜破損、缺失，見不到微絨毛。部分細(xì)胞連接融合、模糊不清或缺損。固有層亦見較多的淋巴細(xì)胞及中性粒細(xì)胞浸潤。大成湯組：吸收細(xì)胞的游離面的微絨毛減少、變短，部分缺損，排列紊亂、稀疏；有的微絨毛呈球形向外膨出，脫落到腸腔中；部分雙層核膜融合、模糊不清，見較多的嗜酸粒細(xì)胞。 2.十二指腸、小腸、結(jié)腸組織的細(xì)菌定量在大成湯與實驗組比較均有明顯差異。 3.實驗組大鼠靜脈血中內(nèi)毒素水平明顯高于正常組和大成湯組，具有

6、統(tǒng)計學(xué)意義。 4.組織勻漿培養(yǎng)菌落數(shù)的多少依次為結(jié)腸、小腸、十二指腸、腸系膜淋巴結(jié)、脾臟、胰腺、肝臟。 結(jié)論 1.本實驗通過建立失血性休克的動物模型，觀察大鼠全身缺血再灌注損傷后腸粘膜超微結(jié)構(gòu)的改變。在失血性休克早期，由于腹腔內(nèi)血液灌注減少和血流再分布的原因，使腸道內(nèi)的血液灌注量明顯減少，腸粘膜缺血、缺氧，發(fā)生粘膜水腫和絨毛斷裂等病理變化，引起腸粘膜屏障功能不全。 2.本實驗通過建立失血性休克的動物模型，

7、進(jìn)行組織細(xì)菌定量、血清內(nèi)毒素含量測量，結(jié)果表明，失血性休克時，即使無原發(fā)感染灶，也會出現(xiàn)膿毒癥及明顯的腸道細(xì)菌移位現(xiàn)象，這也許就是“休克-腸源性膿毒癥-多臟器功能衰竭(MOF)-死亡”的序貫發(fā)生的依據(jù)。 3.本實驗對大鼠回腸近端腸粘膜電子顯微鏡下觀察結(jié)果的差別表明，大成湯對失血性休克再灌注后小腸壁組織損傷有防治作用。 4.本研究實驗組大鼠靜脈血中內(nèi)毒素水平明顯高于正常組和大成湯組。說明了大成湯對防治內(nèi)源性細(xì)菌移位有一定作