殼寡糖對(duì)大鼠腸缺血再灌注損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的：通過建立大鼠輕度和重度腸缺血再灌注(ischemia/reperfusion，I/R)損傷模型，探討殼寡糖對(duì)I/R損傷腸黏膜屏障功能的保護(hù)作用及其可能的作用機(jī)制，為殼寡糖治療腸I/R損傷提供一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。
　　 方法：選用40只清潔級(jí)雄性SD大鼠，體重250-300g。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為5組（每組8只）：①A組：假手術(shù)組（僅分離腸系膜上動(dòng)脈不夾閉）；②B組：重度缺血再灌注組(夾閉腸系膜上動(dòng)脈2h后再灌注2h);③

2、C組：輕度缺血再灌注組(夾閉腸系膜上動(dòng)脈30min后再灌注30min);④D組：重度缺血再灌注+殼寡糖預(yù)處理組；⑤E組：輕度缺血再灌注+殼寡糖預(yù)處理組；A、B、C三組按10ml/kg體重生理鹽水灌胃，D、E兩組給予殼寡糖1500mg/kg體重灌胃，每日1次，連續(xù)5日，造模前30min灌胃一次。所有動(dòng)物術(shù)前12小時(shí)禁食，自由飲水。大鼠常規(guī)腹腔注射麻醉，經(jīng)腹正中切口，暴露并分離腸系膜上動(dòng)脈(superiormesentericartery，

3、SMA)，無損傷動(dòng)脈夾夾閉其起始部，縫合切口，旁照燈保暖。在進(jìn)行SMA夾閉期間，間斷地向腹腔內(nèi)注射生理鹽水，總量約15～20ml/kg體重以保持血流動(dòng)力學(xué)穩(wěn)定。到達(dá)相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)后經(jīng)原切口進(jìn)腹，取出動(dòng)脈夾，恢復(fù)血供，依次關(guān)閉切口。假手術(shù)組進(jìn)行同樣操作但不夾閉腸系膜上動(dòng)脈。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后立即抽取下腔靜脈血3ml，室溫放置15min后4℃下3000rpm離心15min，分離血清，-70℃保存?zhèn)溆?，待做DAO測(cè)定；取距回盲部10cm以內(nèi)的一部分腸標(biāo)本

4、，用生理鹽水漂洗干凈，濾紙吸干，電子天平稱重，按每1g組織添加PBS10ml的比例，低溫下用高速電動(dòng)勻漿機(jī)勻漿30s后，立即4℃下3000rpm離心30min后取上清液，-70℃保存?zhèn)溆?，做SOD、MDA、MPO測(cè)定。取小腸回盲部10cm以上的腸管，經(jīng)冰生理鹽水漂凈，濾紙吸干，延腸管長(zhǎng)軸切開，用玻片輕輕刮取腸黏膜部分，準(zhǔn)確稱取小腸黏膜組織，用PBS制成10％組織勻漿，低溫離心，取上清液，-70℃保存?zhèn)溆?，做SIgA測(cè)定。距回盲部10cm

5、處取相同腸段1.0cm，4％多聚甲醛固定，梯度酒精脫水，透明后石蠟包埋，待做切片。
　　 結(jié)果：1．假手術(shù)組大鼠腸絨毛完整，形態(tài)正常，上皮下間隙無擴(kuò)張；重度缺血再灌注模型組大鼠腸絨毛上皮頂端與固有層分離，腸絨毛頂端破裂，伴固有層毛細(xì)血管暴露、出血和潰瘍，固有層炎性細(xì)胞增多；輕度缺血再灌注模型組較重度模型組病理改變輕。殼寡糖干預(yù)的輕度及重度I/R組腸絨毛病理改變分別較輕、重度I/R模型組明顯減輕，但仍可見腸絨毛頂端破裂，固有層出血

6、和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　 2．缺血再灌注后，B組腸組織中SOD含量為(27.68±8.60)u/100mg，C組腸組織中SOD含量為(44.00±12.74)u/100mg，與A組假手術(shù)組腸組織中SOD含量為(85.88±6.95)u/100mg相比較，差異有顯著性（P＜0.01）。D組腸組織中SOD含量為(45.58±7.26)u/100mg，較B組明顯增加（P＜0.01）。E組腸組織中SOD含量為(65.39±6.37)u/1

7、00mg，較C組明顯增加(P＜0.01)。
　　 3．腸缺血再灌注后，B組腸組織中MDA含量為(3.21±0.91)nmol/mg，C組腸組織中MDA含量為(3.02±0.92)nmol/mg，與A組假手術(shù)組腸組織中MDA含量為(1.53±0.44)nmol/mg相比較，差異有顯著性（P＜0.01）。D組腸組織中MDA含量為(2.06±0.86)nmol/mg，較B組明顯下降（P＜0.01）。E組腸組織中MDA含量為(1.88±

8、0.49)nmol/mg，較C組明顯下降（P＜0.01）。
　　 4．腸缺血再灌注后，B組腸組織中MPO含量為(1.10±0.43)ng/mg，C組腸組中MPO含量為(0.83±0.46)ng/mg，與A組假手術(shù)組腸組織中MPO含量為(0.62±0.33)ng/mg相比較，差異有顯著性(P＜0.01)。D組腸組織中MPO含量為(0.97±0.80)ng/mg，較B組明顯下降（P＜0.05）。E組腸組織中MPO含量為(0.69±0

9、.43)ng/mg，較C組明顯下降(P＜0.01)。
　　 5．腸缺血再灌注后，B組血清中DAO含量為(0.86±0.10)u/ml，C組血清中DAO含量為(0.65±0.09)u/ml，與A組假手術(shù)組血清中DAO含量為(0.37±0.39)u/ml相比較，差異有顯著性(P＜0.01)。D組血清中DAO含量為(0.73±0.95)u/ml，較B組明顯下降（P＜0.01）。E組血清中DAO含量為(0.49±0.83)u/ml，較C

10、組明顯下降（P＜0.01）。
　　 6．腸缺血再灌注后，B組腸黏膜中SIgA含量為(1.09±0.34)ng/mg，C組腸黏膜中SIgA含量為(1.70±0.23)ng/mg，與A組假手術(shù)組腸黏膜中SIgA含量為(4.13±0.63)ng/mg相比較，差異有顯著性（P＜0.01）。D組腸黏膜中SIgA含量為(5.30±1.41)ng/mg，較B組明顯增加（P＜0.01）。E組腸黏膜中SIgA含量為(5.77±0.39)ng/mg