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1、Opiorphin(Gin-Arg-Phe-Set-Arg-OH)是一種在人唾液中分離得到的短肽分子,它能夠通過(guò)在抑制兩種鋅金屬肽鏈外切酶-中性肽鏈內(nèi)切酶(NEP)和氨肽酶N(APN)對(duì)腦啡肽等內(nèi)源性阿片肽的降解,增強(qiáng)它們的生物活性,如鎮(zhèn)痛、抗抑郁等。大鼠實(shí)驗(yàn)表明它的鎮(zhèn)痛作用是嗎啡的6倍。 本文的主要工作是通過(guò)2D-NMR的方法和分子動(dòng)力學(xué)方法研究Opiorphin的空間構(gòu)象。用固相合成的方法合成了Opiorphin。利用1H化
2、學(xué)位移、主鏈的3JNa偶合常數(shù)和質(zhì)子間的NOE分析了Opiorphin中可能存在的二級(jí)結(jié)構(gòu)。從結(jié)果來(lái)看,在DMSO-d6溶液中Opiorphin呈無(wú)規(guī)則卷曲狀態(tài)。我們又用分子動(dòng)力學(xué)計(jì)算方法模擬了Opiorphin在水溶液的構(gòu)象,結(jié)果表明Opiorphin在水溶液中也呈柔性無(wú)規(guī)則卷曲狀態(tài),此構(gòu)象可能是Opiorphin與其受體結(jié)合前的一種狀態(tài),而柔性無(wú)規(guī)卷曲是兩者正確結(jié)合的前提條件。 第一章主要介紹了核磁共振技術(shù)在生物大分子研究中
3、的應(yīng)用,包括基本知識(shí)、標(biāo)記技術(shù)的發(fā)展、TROSY技術(shù)的發(fā)展、蛋白拼接、固體高分辨核磁共振、低溫探頭的應(yīng)用、核磁共振聯(lián)用技術(shù)(LC-NMR)以及核磁共振在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用。 第二章介紹了Opiorphin的研究背景和立題依據(jù)。主要介紹了鋅會(huì)屬肽酶及其抑制劑,Opiorphin等天然抑制劑的研究概況。通過(guò)對(duì)NMR方法的實(shí)驗(yàn)條件和圖譜解析方法的概述說(shuō)明了本文的立題依據(jù)。 第三章介紹了Opiorphin的固相合成以及NMR實(shí)驗(yàn),通過(guò)
4、二維圖譜完成了對(duì)Opiorphin自旋系統(tǒng)的識(shí)別和順序識(shí)別,并通過(guò)NOE,偶合常數(shù)法和化學(xué)位移指數(shù)法證明了Opiorphin在DMSO-d6溶液中呈柔性的無(wú)規(guī)則卷曲狀態(tài)。 第四章介紹了用GROMACS模擬了Opiorphin在水溶液中可構(gòu)象,通過(guò)能量最小化、限制性運(yùn)動(dòng)和分子動(dòng)力學(xué)計(jì)算得到了穩(wěn)定的構(gòu)象。通過(guò)對(duì)其空間構(gòu)象的分析發(fā)現(xiàn)在水溶液中Opiorphin也是以柔性的無(wú)規(guī)則卷曲狀態(tài)存在的。 第五章是對(duì)本論文的研究總結(jié),說(shuō)明
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