FTY720治療伴C-KIT激酶區(qū)突變的急性髓系白血病的機(jī)制研究.pdf

1、第一部分、C-KIT/D816V 突變在急性髓系性白血病中的發(fā)生率調(diào)查
　　 目的：分析C-KIT/D816V 突變在中國人AML患者中的發(fā)生率。
　　 方法：收集2008年至2011年送至干細(xì)胞中心行C-KIT/D816V檢測的AML 外周血標(biāo)本286例，提取者外周血單個核細(xì)胞，采用Real-time Quantitative PCRSYBR green染料法檢測C-KIT D816V突變。
　　 結(jié)果：286

2、例AML患者中，有8例（2.8％，其中6例男性，2例女性）患者發(fā)生了C-KIT/D816V突變，其在男性患者和女性患者中的發(fā)生率分別為3.9％和1.5％，在男性患者中的發(fā)生率高于女性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。8例C-KIT 突變患者中有5例M2，1例M4，另外2例患者FAB 亞型診斷未明。在AML各亞型中的發(fā)生率分別為：M2 6.8％，M4 4.3％。
　　 結(jié)論：C-KIT/D816V突變最常發(fā)生在M2中，其次為M4

3、。在男性患者中的發(fā)生率高于女性。本研究從流行病學(xué)的角度為C-KIT/D816V 突變在中國人AML及其亞型中的發(fā)生率提供了重要依據(jù)。
　　 第二部分、關(guān)于攜帶C-KIT/D816V 突變及C-KIT/WT的急性髓系白血病PP2A蛋白活性變化的研究
　　 目的：從流行病學(xué)的角度探討攜帶C-KIT/D816V[位于C-KIT 激酶區(qū)（C-KIT kinasedomain，C-KIT/TKD）]突變的急性髓細(xì)胞性白血病患者及攜

4、帶野生型C-KIT（C-KIT/WT）的急性髓細(xì)胞性白血病患者單個核細(xì)胞中蛋白磷酸酯酶2A(proteinphosphotase 2A，PP2A)的活性變化，并對攜帶C-KIT/N822K（位于C-KIT/TKD）突變的AML細(xì)胞株Kasumi-1 及攜帶野生型C-KIT的AML細(xì)胞株HL60中PP2A 活性進(jìn)行了比較。
　　 方法：選取8例C-KIT/D816V突變的AML患者，12例C-KIT/WT AML患者及20例健康對

5、照，提取單個核細(xì)胞，使用PP2A 免疫沉淀磷酸酶檢測試劑盒檢測PP2A 活性。體外培養(yǎng)HL60 及Kasumi-1細(xì)胞株，使用PP2A 免疫沉淀磷酸酶檢測試劑盒檢測PP2A 活性。使用SPSS16.0 對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。
　　 結(jié)果：C-KIT/WT AML組患者單個核細(xì)胞PP2A的活性（565.69±1 22.56 pmol）與正常人（706.02±1 54.22 pmol）比較有所降低，而C-KIT/D816V AML組（41

6、9.01±96.97pmol）活性最低，各組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。Kasumi-1細(xì)胞PP2A 活性（886.420±152.187 pmol）與HL60細(xì)胞（1196.442±219.483 pmol）比較有所降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　 結(jié)論：AML 患者PP2A 活性有所降低，且攜帶C-KIT/TKD的AML患者及細(xì)胞株中PP2A 活性與攜帶C-KIT/WT的AML 患者或細(xì)胞株比較有所降

7、低，PP2A 蛋白活性與AML的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，對AML的診斷及治療可能有參考價(jià)值。
　　 第三部分、FTY720 對攜帶C-KIT 激酶區(qū)突變的AML 體外抑制作用的機(jī)制研究
　　 目的：本研究探討FTY720 對攜帶C-KIT/TKD 突變的AML細(xì)胞系Kasumi-1 及未攜帶C-KIT/TKD 突變的AML細(xì)胞系HL-60細(xì)胞增殖、凋亡的影響，并對FTY720 對兩種細(xì)胞作用的進(jìn)行了比較了，探討其可能機(jī)制。<

8、br>　　 方法：體外培養(yǎng)AML細(xì)胞株HL60 及Kasumi-1，使用FTY720（2.5，5，10和20μM）處理HL-60、Kasumi-1細(xì)胞24 小時，應(yīng)用CCK8 試劑盒檢測細(xì)胞的增殖狀況。使用FTY720（10μM）處理細(xì)胞36h，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞的凋亡率。使用FTY720（5μM，10μM）處理細(xì)胞5h，應(yīng)用PP2A 免疫沉淀磷酸酶活性檢測試劑盒測定細(xì)胞PP2A 活性。用FTY720（5μM）處理細(xì)胞5h，應(yīng)用W

9、estern Blot 檢測PP2A的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：FTY720 能有效抑制 HL60和Kasumi-1細(xì)胞的增殖，隨藥物作用濃度的增加，抑制作用越強(qiáng)，作用24h后FTY720對HL60和Kasumi-1的IC50分別為13.5μM和20μM，P<0.05，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。FTY720 作用于HL60和Kasumi-1后，兩種細(xì)胞的凋亡率均增加，且Kasumi-1的凋亡率增加更顯著。FTY720 能增強(qiáng)HL60和