急性髓系白血病多步驟發(fā)病機(jī)制和靶向治療研究.pdf

1、白血病發(fā)病機(jī)制的研究，不僅僅是為了闡述疾病的發(fā)病機(jī)理，更重要的是為了在分子機(jī)制相對(duì)清晰后，針對(duì)與發(fā)病機(jī)制中的致病分子研究靶向治療的藥物及方案。隨著在AML-M2b的發(fā)病機(jī)理的日漸清晰，針對(duì)與致病的主要分子，尋找新的靶向誘導(dǎo)分化或誘導(dǎo)凋亡的治療藥物，或者通過聯(lián)合用藥，探索合理的治療方案，對(duì)提高AML-M2b的臨床療效，改善病人的預(yù)后方面具有重要的理論與實(shí)踐意義。 第一部分，著重討論AMLM2b發(fā)生的遺傳學(xué)機(jī)制。進(jìn)行了AML1-ET

2、O及其選擇性剪切轉(zhuǎn)錄本AML1-ETO9a，Ⅲ型受體酪氨酸激酶C-KIT基因在t(8；21)急性髓性白血病的多步驟發(fā)病機(jī)制中作用的研究，我們?cè)?1例初發(fā)AML1-M2b型白血病病人骨髓標(biāo)本中AML1-ETO9a的篩查工作中發(fā)現(xiàn)，AML1-ETO9a在AML1-M2b型白血病病人中有高比例的發(fā)生率(81.7％，58/71)；同時(shí)在這71例標(biāo)本的29例中檢測(cè)到C-KIT基因發(fā)生突變；且這些AML1-ET09a陽性的病人標(biāo)本中C-KIT表達(dá)量

3、顯著高于AML1-ETO9a陰性病人標(biāo)本(P＜0.0001)；更有趣的是96.6％(28/29)的C-KIT突變都出現(xiàn)在AML1-ETO9a陽性的病人標(biāo)本中。同時(shí)我們發(fā)現(xiàn)，AML1-ETO9a骨髓移植白血病小鼠與正常小鼠相比較，其腫瘤細(xì)胞中伴隨C-KIT基因的高表達(dá)；這些發(fā)現(xiàn)提示AML1-ETO9a的發(fā)生與AML1-M2b型白血病的發(fā)生密切相關(guān)，且顯示AML1-ETO9a的發(fā)生往往伴隨C-KIT的突變/高表達(dá)，二者具有極強(qiáng)的相關(guān)性，AM

4、L1-ETO9a，與C-KIT可能存在直接或者間接的相互關(guān)系，臨床資料分析顯示，AML1-ETO9a和C-KIT與AML-M2b病程的進(jìn)展和預(yù)后密切相關(guān)，很可能成為監(jiān)測(cè)M2b型白血病疾病的發(fā)生發(fā)展的重要分子標(biāo)志。 第二部分，主要討論在體外水平，對(duì)AML-M2b型白血病細(xì)胞株Kasumi-1進(jìn)行誘導(dǎo)分化和誘導(dǎo)凋亡作用的研究。針對(duì)不同的致病分子，我們采用不同的聯(lián)合用藥組合：(1)ATRA1μM，GCSF100ng/ml兩藥聯(lián)合應(yīng)用于

5、Kasumi-1細(xì)胞，CD11c在藥物處理6天時(shí)由15％左右上升至50％左右，CD34熒光強(qiáng)度有所下降，形態(tài)學(xué)上也見部分分化，但是會(huì)引起細(xì)胞的過度增嬗。(2)把G-CSF+ATRA組做為分化誘導(dǎo)劑.冬凌草甲素做為凋亡誘導(dǎo)劑，對(duì)Kasumi-1細(xì)胞進(jìn)行體外作用，可以兼顧分化和凋亡作用。(3)G-CSF100ng/ml，與cAMP100μM聯(lián)合用藥可以抑制G-CSF引起的Kasumi-1細(xì)胞的過度增殖，同時(shí)有一定的分化作用。(4)G-CSF

6、100ng/ml，ATRA1μM，cAMP100μM三藥聯(lián)合應(yīng)用于Kasumi-1細(xì)胞，細(xì)胞有明顯凋亡，但分化效果不明顯。 第三部分，在體外實(shí)驗(yàn)工作的基礎(chǔ)上，探討在動(dòng)物體內(nèi)水平，利用t(8；21)-AML-ETO9a可移植白血病小鼠模型進(jìn)行藥物聯(lián)合靶向治療的方案研究。將G-CSF，ATRA，冬凌草甲素等不同的藥物進(jìn)行組合，治療AML-ETO9a可移植白血病小鼠，研究這些藥物組合的治療作用及機(jī)理。動(dòng)物試驗(yàn)的初步結(jié)果顯示，G-CSF

7、和ATRA與冬凌草甲素三藥聯(lián)合序貫給藥，具有明顯的抗t(8；21)AML1-ETO9a小鼠白血病作用，可以使該白血病小鼠的生存期延長(zhǎng)(中位生存期從28天延長(zhǎng)至51天；P＜0.0001)。外周血象和病理切片也顯示治療組比對(duì)照組浸潤(rùn)明顯減少。小鼠骨髓細(xì)胞表面標(biāo)志分析顯示治療組的分化指標(biāo)上升至正常水平(Gr-1比例在對(duì)照組為6％，治療組為33％，正常組為32％；Mac-1比例在對(duì)照組為5％，治療組為37％，正常組為27％)。檢測(cè)小鼠骨髓細(xì)胞，

8、mRNA水平致病融合基因AML-1-ETO9a在治療組有明顯的下調(diào)。而治療組中仍然剩下強(qiáng)陽性EGFP表達(dá)的一群細(xì)胞，進(jìn)一步分析此群細(xì)胞C-KIT為強(qiáng)陽性，結(jié)合我們前期關(guān)于冬凌草甲素可以特異的降解AML1-ETO融合蛋白這一發(fā)現(xiàn)，該研究為AML，M2b的雙重靶點(diǎn)的靶向治療提供了新的思路和潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值。 第四部分，探討了對(duì)PML-RARα急性早幼粒白血病(APL)小鼠模型的治療研究。盡管三氧化二砷治療APL療效肯定，但其毒性較