抗人巨細(xì)胞病毒gBn1抗體的制備及鑒定.pdf

1、背景：人巨細(xì)胞病毒在全世界普遍存在，臨床癥狀主要發(fā)生于免疫系統(tǒng)發(fā)育不全或嚴(yán)重的免疫力缺乏患者。其包膜糖蛋白B(gB)在病毒感染及誘導(dǎo)機(jī)體免疫反應(yīng)中起重要作用，其中g(shù)Bn1型是主要的致病型之一，在我國的HCMV感染者中占有明顯優(yōu)勢(shì)。 目的：制備能敏感且特異地識(shí)別HCMV gBn1型病毒株的抗體，為今后臨床檢測(cè)HCMV gBn1提供物質(zhì)基礎(chǔ)，并為HCMV疫苗的制備及HCMV的基礎(chǔ)研究提供了有力保障。 實(shí)驗(yàn)方法： 根據(jù)

2、GenBank公布的序列(M60929)，利用計(jì)算機(jī)輔助設(shè)計(jì)，確定并人工合成gBn1抗原多肽，并用Keyhole Limpet Hemocyanin(KLH)交聯(lián)以增強(qiáng)gBn1抗原多肽的免疫原性。將交聯(lián)KLH的gBn1抗原肽免疫新西蘭兔(經(jīng)初次免疫和四次加強(qiáng)免疫)后獲取免疫兔血清，親和純化法純化兔血清中抗gBn1抗體。采用直接ELISA法、免疫細(xì)胞化學(xué)染色法、Western—blot免疫沉淀法鑒定抗gBn1抗體的效價(jià)、反應(yīng)的特異性和敏感

3、性。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果： ELISA法，抗原交叉反應(yīng)等實(shí)驗(yàn)顯示，抗gBn1抗體能夠特異地識(shí)別HCMVTowne株(gBn1型)，制備的抗體效價(jià)1：64000，且與其它型別的HCMV(AD169株及gBn3株)不發(fā)生反應(yīng)。免疫細(xì)胞化學(xué)染色法鑒定結(jié)果顯示抗gBn1型抗體的特異性與PCR測(cè)定gBn1基因型的結(jié)果符合，而且與其他兩型(gBn2型和gBn3型)無交叉反應(yīng)。以HCMV Towne臨床分離株、HCMV AD169病毒株、HCM

4、V gBn3型)床分離株和正常細(xì)胞株為抗原，純化的抗gBn1抗體作為一抗進(jìn)行Western blot分析顯示，抗gBn1抗體Towne株的制備蛋白反應(yīng)后在相對(duì)分子質(zhì)量約110KD處出現(xiàn)1條清晰條帶，符合HCMV gB的分子量。說明所制備的抗體可識(shí)別含有合成多肽相同片斷的HCMV，即gBn1型HCMV，而不識(shí)別其它型別的病毒株，證明抗gBn1抗體具有良好的特異性。 結(jié)論：本研究制備的抗HCMV gan1抗體能敏感且特異地識(shí)別HCM