重組人血管內(nèi)皮抑素聯(lián)合亞葉酸鈣和氟尿嘧啶治療小鼠胃癌移植瘤的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：胃癌是世界上也是我國(guó)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，盡管在一些國(guó)家和地區(qū)胃癌發(fā)病率和死亡率有所降低，但到目前為止，胃癌的發(fā)病率和死亡率居全球腫瘤發(fā)病率和死亡率的第二位。因胃癌具有起病隱襲、早診率低、手術(shù)切除率低、長(zhǎng)期生存率低的特點(diǎn)，臨床療效不夠滿(mǎn)意。晚期胃癌患者已失去手術(shù)或放療等局部治療機(jī)會(huì)，治療以全身化療為主，但至今還沒(méi)有公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)化療方案。分子靶向藥成為治療腫瘤新的發(fā)展方向，分子靶向藥重組人血管內(nèi)皮抑素（恩度，YH-16）聯(lián)合NP（長(zhǎng)春

2、瑞賓+順鉑）化療方案己廣泛應(yīng)用于非小細(xì)胞肺癌，獲得可喜成效并且明顯改善晚期患者生存質(zhì)量。目前YH-16聯(lián)合化療治療肺外腫瘤正處于基礎(chǔ)及臨床研究之中。YH-16阻止腫瘤血管生成，抑制腫瘤生長(zhǎng)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡。亞葉酸鈣（LV）和氟尿嘧啶（5-Fu）即LF方案為治療胃癌公認(rèn)的基礎(chǔ)的化療方案，5-Fu為抗嘧啶類(lèi)抗代謝藥，主要作用于S期細(xì)胞，LV為其增敏劑，LV與5-Fu合用殺滅腫瘤細(xì)胞，使與血管生成有關(guān)的生長(zhǎng)因子分泌減少，進(jìn)而減少腫瘤血管生成

3、。YH-16和LF二者各自針對(duì)不同的細(xì)胞群攻擊腫瘤使腫瘤減小，使YH-16+LF方案治療胃癌具有合理性。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)皮下移植腫瘤的方法建立C57 MFC小鼠前胃癌移植瘤模型，應(yīng)用YH-16+LF方案治療小鼠胃癌移植瘤，研究其對(duì)腫瘤的抑制和殺傷作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：健康的C57小鼠，將MFC小鼠前胃癌細(xì)胞種植于小鼠皮下建成移植瘤模型40只，隨機(jī)分成4組：每組10只，對(duì)照組：腹腔注射等量生理鹽水；YH-16組

4、：0.8mg/Kg，d1-14，腹腔注射；LF組：LV10mg/Kg，5-Fu20mg/Kg，腹腔注射，d1-5，即LF方案；YH-16+LF組：LV10mg/Kg，5-Fu20mg/Kg，d1-5聯(lián)合YH-160.8mg/Kg，d1-14，腹腔注射，即YH-16+LF方案。每天觀(guān)察小鼠的一般情況，每3天測(cè)量腫瘤體積，繪制腫瘤體積生長(zhǎng)曲線(xiàn)；第22天比較治療組的體積抑制率及瘤重抑瘤率；進(jìn)行石蠟切片HE染色，用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)腫瘤組織

5、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）、微血管密度（MVD）、凋亡因子（Fas）表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1.腫瘤體積變化
　　 對(duì)照組腫瘤體積逐漸增大，22天時(shí)體積為1029.32±91.40mm3；治療組包括YH-16組、LF組和YH-16+LF組，治療組腫瘤體積呈上升-下降趨勢(shì)，10天左右開(kāi)始逐漸下降，22天時(shí)體積分別為259.01±75.44mm3、179.49±72.54mm3、93.31±55.79mm3，體

6、積抑制率分別為74.84％、82.56％、90.93％：與對(duì)照組相比，各治療組體積抑制率明顯升高且均有顯著差異（P<0.01）。各治療組間均有顯著差異（P<0.05）。
　　 2.瘤重抑瘤率
　　 治療組YH-16、LF及YH-16+LF組的瘤重抑瘤率分別為43.04％，75.98％，87.53％，與對(duì)照組相比，各治療組抑瘤率均明顯升高且均有顯著差異（P<0.01）。各治療組間瘤重抑瘤率均有顯著差異（P<0.01）。

7、r>　　 3.兩藥相互作用
　　 YH-16+LF方案作用性質(zhì)為協(xié)同作用。
　　 4.小鼠行為學(xué)變化
　　 在用藥的過(guò)程中，YH-16組小鼠活動(dòng)敏捷，精神狀態(tài)好，反應(yīng)靈敏，正常進(jìn)食水，未見(jiàn)明顯不良反應(yīng)。LF組及YH-16+LF組進(jìn)食水稍減少，未發(fā)現(xiàn)嘔吐，活動(dòng)敏捷，體重未見(jiàn)明顯減輕。對(duì)照組小鼠隨著移植瘤結(jié)節(jié)的逐漸長(zhǎng)大，進(jìn)食飲水減少，活動(dòng)減少，消瘦，精神差，反應(yīng)遲鈍。
　　 5.病理組織學(xué)變化
　　

8、 瘤體直徑較大，其中心可見(jiàn)大片細(xì)胞壞死，HE染色呈無(wú)結(jié)構(gòu)的均一紅染，其內(nèi)可見(jiàn)殘留少量尚未壞死的瘤細(xì)胞。體積大小不等，胞核異型多見(jiàn)。與對(duì)照組相比，各治療組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；治療組組間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。
　　 6.VEGF蛋白表達(dá)
　　 對(duì)照組、YH-16、LF、YH-16+LF各組VEGF蛋白表達(dá)分別為68.50±14.25％、39.81±13.64％、52.13±14.96％、15.5

9、1±8.28％。與對(duì)照組比較，各治療組VEGF蛋白表達(dá)均明顯減低且均有顯著差異（P<0.05），各治療組間比較均有顯著差異（P<0.05）。
　　 7 Fas蛋白表達(dá)
　　 對(duì)照組、YH-16、LF、YH-16+LF各組Fas蛋白表達(dá)分別為5.62±4.06％、12.01±4.47％、32.92±8.47％、48.61±7.01％。與對(duì)照組相比，各治療組蛋白表達(dá)均明顯升高且有顯著差異（P<0.05），各治療組間比較均有顯

10、著差異（P<0.01）。
　　 8 MVD計(jì)數(shù)
　　 對(duì)照組、YH-16、LF、YH-16+LF各組MVD計(jì)數(shù)分別為9.51±1.24、2.54±0.86、4.15±1.08、1.28±0.68。與對(duì)照組相比，各治療組MVD計(jì)數(shù)均明顯減少且均有顯著差異（P<0.01）。各治療組間比較均有顯著差異（P<0.01）。
　　 結(jié)論：
　　 1.采用皮下移植腫瘤的方法建立C57小鼠MFC胃癌移植瘤模型，操作上具有

11、良好的可控性和對(duì)比性，移植成功率較高，成瘤時(shí)間短，腫瘤無(wú)自然消退現(xiàn)象。
　　 2.YH-16與LF聯(lián)合治療小鼠胃癌移植瘤具有合理性，并且具有協(xié)同作用。
　　 3.YH-16+LF方案對(duì)小鼠胃癌移植瘤具有明顯的抑制和殺傷作用，近期療效顯著，聯(lián)合用藥未增加化療藥的毒副作用。
　　 4.YH-16通過(guò)下調(diào)VEGF，抑制形成血管的內(nèi)皮細(xì)胞遷移，抑制腫瘤新生血管的生成，降低MVD，阻斷腫瘤細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)供給，聯(lián)合LF的殺傷腫瘤