大鼠同種MSC門靜脈輸注對(duì)肝大部分切除肝衰模型作用的研究.pdf

1、[目的]
　　 肝癌是我國(guó)常見(jiàn)的惡性腫瘤，現(xiàn)階段，肝癌的治療仍然首選手術(shù)治療。但肝癌惡性程度高，預(yù)后差，且肝癌早期缺乏典型臨床癥狀，導(dǎo)致很多肝癌患者在就診時(shí)候往往已經(jīng)喪失手術(shù)治療機(jī)會(huì)。手術(shù)治療肝癌，腫瘤切除后余肝大小及肝硬化程度往往是大肝癌能否切除的關(guān)鍵。術(shù)后發(fā)生肝功能衰竭是最危險(xiǎn)的并發(fā)癥之一。原位肝移植(orthotopic liver transplantation，OTL)是目前治療終末期肝病和代謝性肝病最有效的方法，但目

2、前異體肝移植存在供肝嚴(yán)重不足，手術(shù)及維持費(fèi)用昂貴，手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)大，以及移植由于免疫排斥的發(fā)生而導(dǎo)致供肝功能喪失等缺點(diǎn)，OTL在臨床廣泛開(kāi)展仍有一定的困難。
　　 干細(xì)胞移植技術(shù)的出現(xiàn)，帶來(lái)新的希望。
　　 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow stem cell，BMSC)具有多能分化的特點(diǎn)，在體外不同的誘導(dǎo)條件下可分化為骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、肌腱、肌肉細(xì)胞、肝細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等多種細(xì)胞。由于BMSC有取材方便、易于

3、體外培養(yǎng)擴(kuò)增、植入體內(nèi)不易引起免疫排異反應(yīng)、不存在倫理學(xué)爭(zhēng)議等眾多優(yōu)點(diǎn)，而且近年的研究發(fā)現(xiàn)，MSCs對(duì)肝臟疾病治療不僅在于為替代肝細(xì)胞移植、在早期即能修復(fù)肝臟損傷，而且還能夠降低宿主抗移植物反應(yīng)。MSCs作為種子細(xì)胞治療終末期肝病的應(yīng)用將越來(lái)越大。
　　 為了進(jìn)一步改善肝大部分切除術(shù)后肝功能衰竭的情況，降低圍手術(shù)期死亡率，本研究將對(duì)骨髓間充質(zhì)細(xì)胞(MSC)肝內(nèi)移植對(duì)大鼠肝80％切除肝衰竭模型術(shù)后肝功能、生存率的影響作初步探討。<

4、br>　　 [方法]
　　 1.肝大部分切除邊緣肝衰竭大鼠模型的建立：手術(shù)切除大鼠80％肝組織(切除肝左葉、右葉、方葉下段，保留方葉上段、尾葉)，觀察大鼠的存活，肝功能生化指標(biāo)；建立大鼠極限肝切除模型。(n=15)
　　 2.移植MSC制備：梯度離心+貼壁法分離大鼠原代MSC，傳代純化，流式細(xì)胞學(xué)鑒定，用脂質(zhì)體Lipofectamine2000將PE-GFP C3轉(zhuǎn)染MSC作為體內(nèi)示蹤工具。
　　 3.MSC肝

5、內(nèi)移植對(duì)肝大部分切除邊緣肝衰竭模型術(shù)后生存率、肝功能的影響： A組，即實(shí)驗(yàn)組(n=18)：80％肝葉切除+門脈注射0.5ml含1×106MSC的PBS，B組，即對(duì)照組(n=18)：80％肝葉切除+門脈注射0.5mlPBS。觀察術(shù)后大鼠的存活率、肝功能生化指標(biāo)及受體大鼠肝組織內(nèi)移植細(xì)胞情況。
　　 [結(jié)果]
　　 1.手術(shù)切除大鼠80％肝組織可以建立大鼠極限肝切除模型。7天后存活情況7/15，存活率為46.7％。
　

6、　 2.成功分離大鼠原代MSC，流式細(xì)胞學(xué)結(jié)果CD29+(99.3％)、CD44+(97.1％)CD34+(0.7％)、CD45+(1.4％)。GFP標(biāo)記MSC成功。
　　 3.MSC肝內(nèi)移植對(duì)肝大部分切除模型術(shù)后生存率、肝功能的影響：術(shù)后7天內(nèi)的存活率分別為A組72.2％(13/18)、B組44.4％(8/18)。A組的存活率明顯高于B組(72.2％VS44.4％，P＜0.05；A組大鼠術(shù)后肝功能恢復(fù)情況明顯優(yōu)于B組(p＜0