補陽還五湯有效部位抗大鼠血管內(nèi)膜增生及VSMC增殖的研究.pdf

1、目的：在成功復制大鼠主動脈內(nèi)膜增生模型的基礎(chǔ)上，通過研究補陽還五湯及其有效部位生物堿和苷對大鼠主動脈內(nèi)膜損傷后的血管形態(tài)學變化、VSMC增殖標記物PCNA表達和增殖相關(guān)的周期蛋白cyclinD1、cyclinE表達的影響，探討該方抗VSMC增殖的物質(zhì)基礎(chǔ)，揭示其抗VSMC增殖的細胞周期調(diào)控機制。
　　 方法：
　　 1.采用國產(chǎn)2.0F球囊導管建立大鼠主動脈內(nèi)膜剝脫模型，分別用組織形態(tài)學和免疫組織化學方法，測定大鼠血管內(nèi)

2、皮剝脫后內(nèi)膜增生情況及SMα-actin、PCNA及collagen I的表達活性，探討該模型的特性。
　　 2.將大鼠隨機分為七組，即：假手術(shù)組、模型組、生物堿組、苷組、補陽還五湯原方組、三七總皂苷組、阿托伐他汀組，以球囊導管損傷血管內(nèi)膜造模，造模后第二天開始灌胃給藥，連續(xù)給藥14 天。術(shù)后第16 天取胸主動脈血管損傷段，分別測定血管形態(tài)計量指標及PCNA、cyclinD1和cyclinE的表達。
　　 結(jié)果：

3、　　 1. 采用國產(chǎn)球囊導管反復3 次剝脫大鼠胸腹主動脈，術(shù)后14d 內(nèi)膜增生明顯，SMα-actin 及PCNA 表達均明顯增強(均P＜0.01)；術(shù)后21d 內(nèi)膜呈進行性彌漫性增生，SMα-actin 表達仍明顯增高(P＜0.01)，但PCNA 表達不明顯。模型7d、14d、21d 組collagen I 表達與假手術(shù)組比較，差異均無顯著性意義(P＞0.05)。
　　 2. 采用國產(chǎn)球囊導管反復6 次剝脫大鼠胸腹主動脈，術(shù)

4、后第16 天內(nèi)膜即出現(xiàn)顯著增生。各組血管形態(tài)學變化：假手術(shù)組大鼠主動脈壁各層結(jié)構(gòu)完整，管腔面積無縮小，內(nèi)膜光滑無增生，中膜VSMC 排列整齊；模型組大鼠胸主動脈內(nèi)膜呈彌漫性增厚，管腔面積明顯縮小，增厚的內(nèi)膜中以VSMC 為主，中膜細胞排列紊亂；補陽還五湯原方組、生物堿組、苷組、阿托伐他汀組、三七總皂苷組內(nèi)膜均有增生，管腔口徑有不同程度縮小，但增生程度明顯輕于模型組。
　　 血管形態(tài)計量指標分析表明，各組中膜面積和中膜厚度均無顯著

5、變化(P＞0.05)。模型組的內(nèi)膜面積、內(nèi)膜厚度、內(nèi)膜面積增生比率、內(nèi)膜厚度增生比率、內(nèi)膜/中膜面積比、內(nèi)膜/中膜厚度比均顯著大于假手術(shù)組(P＜0.01)；生物堿組、苷組、補陽還五湯原方組、三七總皂苷組、阿托伐他汀組的內(nèi)膜面積、內(nèi)膜厚度、內(nèi)膜面積增生比率、內(nèi)膜厚度增生比率、內(nèi)膜/中膜面積比、內(nèi)膜/中膜厚度比均顯著低于模型組(P＜0.01~ P＜0.05)。
　　 各組增生內(nèi)膜PCNA 表達的比較：模型組PCNA 表達較假手術(shù)組顯

6、著增強(P＜0.01)。生物堿組、苷組、三七總皂苷組、阿托伐他汀組PCNA 表達較假手術(shù)組也均顯著增強(P＜0.01~ P＜0.05)，但均顯著低于模型組(P＜0.01)。
　　 而補陽還五湯原方組PCNA 表達顯著高于假手術(shù)組(P＜0.01)，其表達強度雖略低于模型組，但差異無顯著性意義(P＞0.05)。
　　 各組增生內(nèi)膜cyclinD1和cyclinE表達的比較：模型組cyclinD1表達較假手術(shù)組均顯著增強(P＜

7、0.01)；生物堿組、苷組、補陽還五湯原方組、三七總皂苷組、阿托伐他汀組cyclinD1表達均顯著低于模型組(P＜0.05～P＜0.01)。模型組cyclinE表達較假手術(shù)組顯著增強(P＜0.01)。生物堿組、苷組、三七總皂苷組cyclinE表達均顯著低于模型組(P＜0.05～P＜0.01)。而補陽還五湯原方組、阿托伐他汀組cyclinE表達強度雖略低于模型組，但差異無顯著性意義(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：國產(chǎn)2.0F球囊導

8、管致大鼠主動脈內(nèi)皮剝脫術(shù)后14～21d可出現(xiàn)明顯的血管內(nèi)膜增生引起的血管再狹窄。增生內(nèi)膜中PCNA、cyclinD1、cyclinE表達均增強，其內(nèi)膜增生主要是由于VSMC增殖所致。在造模術(shù)后第十六天, 補陽還五湯及其兩類有效部位生物堿和苷能顯著抑制血管內(nèi)膜增生，抑制PCNA、cyclinD1和cyclinE的表達，通過阻抑細胞周期的啟動而抗VSMC的增殖，從而起到抑制血管內(nèi)膜增生的作用。且由補陽還五湯提取的兩類有效部位的抗血管內(nèi)膜增生