Walker256大鼠乳腺癌骨轉(zhuǎn)移性癌痛模型的建立及伊班膦酸鈉作用機制的探討.pdf

1、目的：乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，乳腺癌易發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移，而骨骼又是乳腺癌遠處轉(zhuǎn)移的常見部位。骨痛、骨損傷、骨相關事件（SREs）及生活質(zhì)量降低是乳腺癌骨轉(zhuǎn)移的常見并發(fā)癥，嚴重影響患者的生活質(zhì)量。
　　 骨癌痛是最嚴重的一種癌痛，主要源于原發(fā)性骨腫瘤或肺癌、乳腺癌、前列腺癌等繼發(fā)骨轉(zhuǎn)移，嚴重影響癌癥患者的生活質(zhì)量。在1999年Schwei等首次報道小鼠骨癌痛模型之前，癌痛研究一直是在非癌癥引起的慢性疼痛模型上進行的。實際上，

2、兩者的發(fā)病機制并不相同，而在神經(jīng)病理性疼痛治療中有效的藥物也不能緩解癌痛。近年來，運用局部注射方法將不同的腫瘤細胞接種至脛骨骨髓腔內(nèi)，成功建立了脛骨癌痛模型，該模型可視為轉(zhuǎn)移性骨癌痛模型，為揭示癌痛的機制及臨床防治提供了有效的研究手段。
　　 目前乳腺癌骨轉(zhuǎn)移的診斷主要依靠X線、CT、ECT等影像學手段，診斷率低。骨鈣素（BGP）是由成骨細胞合成、釋放的一種維生素K依賴蛋白。文獻報道，惡性腫瘤骨轉(zhuǎn)移時血清BGP會發(fā)生一定的變化，

3、血清BGP對惡性腫瘤骨轉(zhuǎn)移的診斷有一定參考價值。
　　 有資料報道，腫瘤所致的骨質(zhì)破壞活動產(chǎn)生一些細胞因子（例如ET-1，PGE2），他們在導致骨溶解的同時，也致敏周圍神經(jīng)末梢，因而增加了機體對痛覺刺激的敏感性。伊班膦酸鈉屬于第三代雙膦酸鹽類藥物，該藥可顯著減少乳腺癌骨轉(zhuǎn)移患者的骨相關事件，明顯緩解骨痛，改善生活質(zhì)量。
　　 因此，我們運用Walker256大鼠乳腺癌細胞來制備脛骨癌痛模型，在該模型的基礎上研究疼痛行為學

4、變化，骨質(zhì)病理組織學改變；在大鼠脛骨癌痛模型的基礎之上，測定血清BGP水平，探查血清BGP在乳腺癌骨轉(zhuǎn)移中的診斷價值，以實現(xiàn)乳腺癌骨轉(zhuǎn)移的早期診斷；應用該模型觀察伊班膦酸鈉的抗骨癌痛作用，并觀察細胞因子內(nèi)皮素-1（ET-1）、前列腺素E2（PGE2）在骨癌痛形成過程中及治療后的變化，從而探討骨癌痛的形成以及雙膦酸鹽發(fā)揮作用可能的分子機制，并且為今后骨癌痛分子靶向藥物的研制奠定基礎。
　　 方法：
　　 將60只Wista

5、r大鼠（160-180g）隨機分成PBS組、觀察組、治療組3組，每組20只。對于觀察組、治療組大鼠應用微量進樣器向Wistar大鼠左側(cè)脛骨骨髓腔內(nèi)接種walker256大鼠乳腺癌細胞，4ul/只（含4*104個大鼠乳腺癌細胞）構建大鼠脛骨癌痛模型；對于PBS組大鼠應用微量進樣器向Wistar大鼠左側(cè)脛骨骨髓腔內(nèi)接種同等體積的無菌PBS溶液。治療組大鼠于造模后（post implantation day，PID）8天開始，皮下注射伊班膦酸

6、鈉4ug/只1/日，連用10天；PBS組和觀察組皮下注射等體積的生理鹽水，1/日，連用10天。分別于PID0，6，8，11，14，17進行一般狀況觀察，以及大鼠自由行走痛行為評分和丙酮刺激引發(fā)縮足反應時間的測定；并于PID17應用放射免疫法進行大鼠血清BGP，血漿ET-1，PGE2測定及大鼠左側(cè)脛骨HE染色。用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理，各組數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差的形式表示。
　　 結(jié)果：
　　 1.大鼠一般狀況<

7、br>　　 在整個觀察期內(nèi)，無一例大鼠死亡。各組大鼠造模前后，在精神狀態(tài)、進食水、體重方面均無顯著差異。體重在觀察期內(nèi)均緩慢增加。
　　 2.大鼠疼痛行為學變化
　　 2.1自由行走痛行為學評分
　　 PBS組在造模后評分有所升高，最高達1分，但于PID6開始逐漸下降恢復正常；觀察組、治療組大鼠造模后評分亦升高，但較PBS組升高明顯，最高達4分，于PID6與PBS組相比有顯著差異（F=12.83，P<0.01）

8、；治療組大鼠于PID14（給藥第7天）內(nèi)評分與觀察組并無明顯差異，于PID14，PID17與觀察組相比評分顯著下降，但仍明顯高于PBS組。
　　 2.2縮足反應時間
　　 兩組造模動物于PID8縮足反應時間明顯下降（P<0.01），與PBS組相比有顯著統(tǒng)計學差異。治療組大鼠于PID14（給藥第7天）縮足反應時間較觀察組明顯延長（P<0.05），但仍短于PBS組；于PID17，與PBS組無明顯差異（P>0.05）。

9、　　 2.3骨組織病理學改變（HE染色）
　　 PBS組：骨髓腔內(nèi)可見各種正常的骨髓細胞，未見骨結(jié)構改變。觀察組：骨髓腔內(nèi)幾乎被核大深染的腫瘤細胞所填充，大部分呈活躍狀態(tài)，部分腫瘤細胞己壞死，骨小梁稀少。治療組：骨髓腔內(nèi)可見少量生長活躍的腫瘤細胞，大部分腫瘤細胞已壞死，骨小梁破壞明顯。
　　 2.4各組大鼠血清骨鈣素（BGP）含量的比較
　　 與PBS組相比，觀察組大鼠血清中BGP含量明顯升高（P<0.01），

10、有顯著統(tǒng)計學差異。治療組大鼠血清BGP含量較觀察組顯著下降（P<0.05），但仍顯著高于PBS組（P<0.05）。
　　 2.5各組大鼠血漿內(nèi)皮素-1（ET-1）含量的比較
　　 與PBS組相比，觀察組大鼠血漿中ET-1含量明顯升高（P<0.01，），有顯著統(tǒng)計學差異。治療組大鼠血漿ET-1含量較觀察組顯著下降（P<0.01），與PBS組相比無統(tǒng)計學差異。
　　 2.6各組大鼠血漿前列腺素E2（PGE2）含量的比

11、較
　　 與PBS組相比，觀察組大鼠血漿中PGE2含量明顯升高（P<0.05），有統(tǒng)計學差異。治療組大鼠血漿PGE2含量較觀察組顯著下降（P<0.01），與PBS組相比無統(tǒng)計學差異。
　　 結(jié)論：
　　 1.本研究成功構建了一個與人類乳腺癌骨轉(zhuǎn)移所致骨癌痛相似的動物模型，為進一步研究骨癌痛的機制奠定基礎。
　　 2.血清BGP對乳腺癌骨轉(zhuǎn)移的診斷有一定的臨床參考價值。
　　 3.骨癌痛的產(chǎn)生與ET