三葉因子-3對甲狀腺乳頭狀癌細胞增殖及遷徙作用的研究.pdf

1、河北醫(yī)科大學學位論文使用授權(quán)及知識產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學位論文在導師(或指導小組)的指導下，由本人獨立完成。本學位論文研究所獲得的研究成果，其知識產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學所有。河北醫(yī)科大學有權(quán)對本學位論文進行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學位論文主要內(nèi)容相關(guān)的論文，第一署名為單位河北醫(yī)科大學，試驗材料、原始數(shù)據(jù)、申報的專利等知識產(chǎn)權(quán)均歸河北醫(yī)科大學所有。否則，承擔相應(yīng)法律責任。研究生簽名：愛軸婦備導師簽章：河北醫(yī)科大學研究生學位論文獨創(chuàng)性聲明本論文是在

2、導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標注和致謝等內(nèi)容外，文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，指導教師對此進行了審定。本論文由本人獨立撰寫。文責自負：研究生簽名：玲耳圭著導師簽章：伊緝?nèi)罩形恼~因子3對甲狀腺乳頭狀癌細胞增殖及遷移作用的研究摘要目的：應(yīng)用小發(fā)卡狀RNA(smallhairpinRNA，shRNA)沉默TFF3(trefoilfactor3)基因表達，探索其對人甲狀腺癌乳頭狀癌Kl細胞增殖和侵

3、襲的影響。方法：采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將靶向TFF3基因的TFF3shRNA瞬時轉(zhuǎn)染人甲狀腺乳頭狀癌K1細胞，使相應(yīng)的基因沉默。實驗設(shè)空白對照組(Con組)、陰性對照組(ConNC組)和干擾組(TFF3shRNA組)。分別采用逆轉(zhuǎn)錄PCR和實時熒光定量PCR、免疫細胞化學技術(shù)、蛋白質(zhì)印跡法檢測轉(zhuǎn)染TFF3shRNA后Kl細胞中TFF3mRNA及其蛋白的表達；CCK8實驗檢測三組細胞的增殖能力的改變、細胞劃痕試驗檢測Kl細胞侵襲能力變化。結(jié)果：

4、1成功將攜有TFF3shRNA基因的重組質(zhì)粒Ca群HSH0180374HⅣmU6轉(zhuǎn)染K1細胞。2RTPCR和RealtimePCR檢測TFF3mRNA表達，TFF3基因沉默后TFF3mRNA表達降低，是空白對照組0380I0110倍(pO05)。3TFF3蛋白表達：Westernblot提示TFF3基因沉默后TFF3蛋白表達降低595％，與空白對照組比較，差異具有統(tǒng)計學意義(pO01)。4免疫細胞化學染色顯示TFF3蛋白位于K1細胞胞漿

5、，與對照組相比，干擾組TFF3明顯低表達。5細胞劃痕檢測K1細胞侵襲能力，干擾組(TFF3shRNA組)K1細胞的侵襲能力減弱、9劃痕寬度與空自對照組比較減少5Z’l％j差異具有統(tǒng)計學意義(pO01)。6CCK8試劑盒檢測細胞增殖能力，通過生長曲線分析干擾組K1細胞生長明顯慢于空白對照組細胞(po01)；干擾組(TFF3shRNA組)K1細胞在6h、12h、24h、36h、48h增殖抑制率分別為166％、266％、336％、338％、3