多西紫杉醇對(duì)人甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞放射增敏作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：觀察多西紫杉醇對(duì)人甲狀腺乳頭狀癌TPC-1細(xì)胞增殖抑制、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期分布及其相關(guān)蛋白表達(dá)的影響，來初步探討多西紫杉醇對(duì)人甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞放射增敏的作用及其機(jī)制，為臨床精準(zhǔn)治療提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　1.不同濃度(5×10-3、5×10-2、5×10-1、5、10、20、50、100ug/ml)的多西紫杉醇作用于體外培養(yǎng)的人甲狀腺乳頭狀癌TPC-1細(xì)胞，通過CCK-8法測(cè)定24h、48h、72h后TPC-

2、1細(xì)胞的增殖抑制情況，并且繪制細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制曲線。
　　2.采用克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)0.005ug/ml多西紫杉醇對(duì)甲狀腺乳頭狀癌TPC-1細(xì)胞放射增敏作用，采用單擊多靶數(shù)學(xué)模型擬合細(xì)胞存活曲線，計(jì)算相關(guān)放射學(xué)參數(shù)。
　　3.將甲狀腺乳頭狀癌TPC-1細(xì)胞分別設(shè)為空白對(duì)照組、單純照射組(8Gy照射)、單純藥物組(0.05ug/ml多西紫杉醇)、藥物加照射組(0.05ug/ml多西紫杉醇加8Gy照射)，分別給予上述不同處理后通過流

3、式細(xì)胞儀測(cè)定24h、48h、72h各組細(xì)胞的凋亡率情況及處理24h后各組細(xì)胞的周期分布情況。
　　4.采用Western blotting技術(shù)檢測(cè)不同處理后各組細(xì)胞Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　1.CCK-8檢測(cè)結(jié)果：不同濃度多西紫杉醇(5×10-3、5×10-2、5×10-1、5、10、20、50、100ug/ml)作用甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞后，與對(duì)照組比較，各處理組的吸光度A值均顯著下降，差異具有統(tǒng)

4、計(jì)學(xué)意義，且存在明顯的劑量和時(shí)間依賴性，半數(shù)抑制濃度為6.06 ug/ml(24h)，1.39 ug/ml(48h)，0.09ug/ml(72h)。
　　2.克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果：藥物+照射組的SF2、D0、Dq較單純照射組均有所下降，多西紫杉醇的放射增敏比（SER）為1.53。
　　3.Annexin V-FITC/PI染色法檢測(cè)細(xì)胞凋亡率：三個(gè)處理組較對(duì)照組相比，TPC-1細(xì)胞的凋亡指數(shù)在處理24h、48h、72h后均明顯增

5、加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；且不同時(shí)間段藥物加照射組的凋亡率也明顯高于單純照射組。
　　4.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期結(jié)果：空白對(duì)照組的甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞大部分處于G1期，其次為S期，G2/M期所占比例最少。給予TPC-1細(xì)胞單純照射、單純藥物、藥物加照射處理24h后，與空白對(duì)照組相比，各周期發(fā)生變化，多西紫杉醇使TPC-1細(xì)胞發(fā)生G2/M期阻滯，與單純照射組相比，藥物+照射組顯著增加G2/M期細(xì)胞阻滯。
　　5 Western b

6、lotting檢測(cè)不同處理組作用于甲狀腺乳頭狀癌TPC-1細(xì)胞24h后，各組蛋白表達(dá)情況：?jiǎn)渭冋丈浣M、單純藥物組和藥物加照射組Bax表達(dá)水平均高于空白對(duì)照組，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，藥物加照射組的表達(dá)量高于單純照射組和單純藥物組；并且三個(gè)組的Bcl-2蛋白表達(dá)水平較空白對(duì)照組相比明顯降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；藥物加照射組低于單純藥物組和單純照射組。與空白對(duì)照組相比，各組Bcl-2／Bax比值均明顯下降，統(tǒng)計(jì)學(xué)具有顯著性差異，藥物加照射組低于單