新輔助化療后口腔頜面—頭頸部鱗癌組織中Omi-HtrA2的表達(dá)及意義.pdf

1、目的:頭頸癌是世界范圍內(nèi)第六大常見癌癥[1，2]，其中，鱗狀細(xì)胞癌是最常見的類型。新輔助化療是目前治療頭頸鱗癌的主要方法之一。新輔助化療首先由Frei在1982年提出，1989年由Skarin就其臨床效果做了初步報(bào)道，隨后人們將其應(yīng)用于頭頸鱗癌的治療，并一直探索如何使其提高頭頸鱗癌的控制率及生存率。隨著對腫瘤形成機(jī)制的深入研究，人們逐漸認(rèn)識到腫瘤細(xì)胞對細(xì)胞凋亡的敏感性是決定化療效果的關(guān)鍵因素，人們對Omi/HtrA2的發(fā)現(xiàn)、研究及深入，

2、越來越多地研究指向Omi/HtrA2能夠誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并可以加強(qiáng)細(xì)胞對化療藥物的敏感性，同時(shí)證實(shí)通過對Omi/HtrA2的干預(yù)可能成功地阻止腫瘤的發(fā)展。本實(shí)驗(yàn)通過應(yīng)用RT-PCR及免疫組化的方法檢測經(jīng)新輔助化療藥物——奈達(dá)鉑干預(yù)前后頭頸鱗癌組織中Omi/HtrA2的表達(dá)情況，從而為新輔助化療的應(yīng)用提供理論依據(jù)，有望為如何提高頭頸鱗癌控制率及生存率的研究提供新思路。
　　方法:收集我院2012年03月至2013年08月間頭頸鱗癌患者

3、標(biāo)本45例。所有患者手術(shù)前均局部取檢經(jīng)病理證實(shí)，并應(yīng)用奈達(dá)鉑術(shù)前誘導(dǎo)化療。標(biāo)本均為術(shù)后立即取材，一式兩份，一份固定于4％甲醛中，一份置-80℃低溫冰箱中，編號保存?zhèn)溆谩?br>　　1 RT-PCR檢測奈達(dá)鉑干預(yù)前后Omi/HtrA2基因在頭頸鱗癌組織、鱗癌癌旁組織中的表達(dá)
　　行組織研磨，應(yīng)用Trizol提取總RNA，用瓊脂糖凝膠電泳鑒定提取出的總RNA，用紫外分光光度計(jì)對其進(jìn)行定量。按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明操作將提取的RNA合成cD

4、NA第1鏈，而后擴(kuò)增目的基因，以β-acton基因作為擴(kuò)增產(chǎn)物的內(nèi)參，用凝膠成像系統(tǒng)觀察結(jié)果，行圖像采集。
　　2免疫組織化學(xué)檢測奈達(dá)鉑干預(yù)前后Omi/HtrA2在頭頸鱗癌組織、鱗癌癌旁組織的表達(dá)
　　將各組包埋組織的蠟塊，脫蠟至水，按Maxvision2/HRP試劑盒操作說明操作，電鏡下觀察。
　　3結(jié)果判斷
　　3.1半定量分析Omi/HtrA2基因的表達(dá)情況
　　將目的產(chǎn)物和β-actin的條帶行灰度

5、掃描，并運(yùn)用Quantity One軟件定量分析結(jié)果。
　　3.2免疫組化分析Omi/HtrA2的表達(dá)情況
　　Omi/HtrA2染色陽性表達(dá)為胞漿中找到棕黃色顆粒，用免疫組化半定量法評價(jià)結(jié)果，進(jìn)行病理分級、分組，并記錄。
　　4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
　　SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包分析數(shù)據(jù)，采用重復(fù)測量的方差分析、x2檢驗(yàn)和SNK兩兩比較的方法進(jìn)行檢驗(yàn)，P＜0.05計(jì)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1免疫

6、組化檢測Omi/HtrA2在各組中的表達(dá)情況。
　　免疫組化檢測用藥前頭頸鱗癌組、癌旁組織組中Omi/HtrA2陽性表達(dá)率分別為64.4％(29/45)、13.3％(6/45)，兩組間經(jīng)卡方檢驗(yàn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;用藥后頭頸鱗癌組、癌旁組織組中Omi/HtrA2陽性表達(dá)率分別為80％(36/45)、42.2％(19/45)，兩組間經(jīng)卡方檢驗(yàn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　2免疫組化檢測Omi/HtrA2

7、在不同病理分級中的表達(dá)情況。
　　免疫組化檢測用藥前高分化鱗癌組、低分化鱗癌組、鱗癌癌旁組織組中Omi/HtrA2陽性表達(dá)率分別為66.7％(24/36)、55.6％(5/9)、13.3％(6/45)，SNK法兩兩比較表明，高分化口腔鱗癌組中的表達(dá)均高于低分化鱗癌組織、鱗癌癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。用藥后高分化鱗癌組、低分化鱗癌組、鱗癌癌旁組織組中Omi/HtrA2陽性表達(dá)率分別為88.9％(32/36)、66.

8、7％(6/9)、42.2％(19/45)，SNK法兩兩比較表明，高分化口腔鱗癌組中的表達(dá)均高于低分化鱗癌組織、鱗癌癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　3免疫組化檢測奈達(dá)鉑干預(yù)前后Omi/HtrA2在各組中的表達(dá)情況。
　　高分化鱗癌組用藥前后Omi/HtrA2的表達(dá)率分別為66.7％(24/36)、88.9％(32/36)，低分化鱗癌組用藥前后Omi/HtrA2的表達(dá)率分別為55.6％(5/9)、66.7％(6

9、/9)，癌旁組織組用藥前后Omi/HtrA2的表達(dá)率分別為13.3％(6/45)、42.2％(19/45)。Omi/HtrA2在三組用藥前后組織內(nèi)的表達(dá)率間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），組織間亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，SNK法兩兩比較表明，高分化鱗癌組中的表達(dá)均高于低分化鱗癌組、鱗癌癌旁組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4 PCR檢測Omi/HtrA2在各組中的表達(dá)情況。
　　用藥前頭頸鱗癌組、癌旁組織組中Omi/HtrA2基因的灰度值

10、分別為0.7236±0.1353、0.3761±0.1526，兩組間經(jīng)卡方檢驗(yàn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05);用藥后頭頸鱗癌組、癌旁組織組中Omi/HtrA2基因的灰度值分別為1.2032±0.1450、0.4350±0.1172，兩組間經(jīng)卡方檢驗(yàn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。所得結(jié)果與免疫組化結(jié)果相符。
　　5 PCR檢測Omi/HtrA2在不同病理分級中的表達(dá)情況。
　　用藥前高分化鱗癌組、低分化鱗癌組、鱗癌癌旁組

11、織組中Omi/HtrA2的灰度值依次遞減，分別為0.8126±0.1249、0.4627±0.1123、0.3761±0.1526，Omi/HtrA2基因在三種組織中的表達(dá)量間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），SNK法兩兩比較表明，高分化口腔鱗癌組中的表達(dá)均高于低分化鱗癌組織、鱗癌癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;用藥后高分化鱗癌組、低分化鱗癌組、鱗癌癌旁組織組中Omi/HtrA2基因的灰度值分別為1.3553±0.1614、

12、0.6718+0.1421、0.4350±0.1172，SNK法兩兩比較表明，高分化口腔鱗癌組中的表達(dá)均高于低分化鱗癌組織、鱗癌癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。RT-PCR結(jié)果顯示，Omi/HtrA2在以上三組組織中的表達(dá)存在顯著差異，呈遞減趨勢，與免疫組化結(jié)果相一致。
　　6 PCR檢測奈達(dá)鉑干預(yù)前后Omi/HtrA2在各組中的表達(dá)情況。
　　經(jīng)過奈達(dá)鉑干預(yù)后，鱗癌組織中Omi/HtrA2的表達(dá)明顯高于干預(yù)前O

13、mi/HtrA2的表達(dá)情況，高分化鱗癌組用藥前后的灰度值分別為0.8126±0.1249、1.3553±0.1614，低分化鱗癌組用藥前后的灰度值分別為0.4627±0.1123、0.6718±0.1421，癌旁組織組用藥前后的灰度值分別為0.3761±0.1526、0.4350±0.1172。Omi/HtrA2基因在三組用藥前后組織內(nèi)的表達(dá)量間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），組織間亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，SNK法兩兩比較表明，高分化鱗癌組中

14、的表達(dá)均高于低分化鱗癌組、鱗癌癌旁組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與免疫組化結(jié)果一致。
　　結(jié)論:
　　1奈達(dá)鉑干預(yù)前后Omi/HtrA2在頭頸鱗癌組與鱗癌癌旁組中的表達(dá)均存在顯著差異，頭頸鱗癌組中Omi/HtrA2的表達(dá)高于鱗癌癌旁組，2組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　2 Omi/HtrA2的表達(dá)與細(xì)胞分化程度有關(guān)，其在高分化鱗癌組的表達(dá)高于低分化組及癌旁組織組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
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