卡介苗對(duì)哮喘小鼠轉(zhuǎn)錄因子T-bet與GATA-3表達(dá)的影響.pdf

1、支氣管哮喘是由嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞等多種炎性細(xì)胞和細(xì)胞組分參與的氣道慢性炎癥性疾病。研究證實(shí)，支氣管哮喘的發(fā)病與Th1/Th2失衡有著密切關(guān)系，Th2細(xì)胞活化亢進(jìn)是哮喘發(fā)病的重要機(jī)理。目前對(duì)哮喘防治重點(diǎn)已由單純抗呼吸道痙攣轉(zhuǎn)向抗炎治療，尤其如何促進(jìn)Th0型細(xì)胞向Th1轉(zhuǎn)化，抑制Th2細(xì)胞從而控制哮喘發(fā)展?，F(xiàn)有資料發(fā)現(xiàn)多種轉(zhuǎn)錄因子或細(xì)胞內(nèi)信號(hào)途徑與Th細(xì)胞分化有關(guān)。其中轉(zhuǎn)錄因子GATA-3和T-bet在其中發(fā)揮著重要作用。有

2、人認(rèn)為T(mén)-bet與GATA-3的平衡決定了T細(xì)胞在黏膜免疫的命運(yùn)，決定了Th1/Th2平衡的穩(wěn)定性[3]?？ń槊纾˙CG）作為非特異性免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)劑，能抑制Th2型免疫反應(yīng)而上調(diào)Th1型免疫反應(yīng)，減輕氣道炎癥反應(yīng)。但卡介苗是否調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子T-bet與GATA-3的平衡來(lái)減輕氣道炎癥尚未見(jiàn)報(bào)道。 目的：通過(guò)建立小鼠哮喘模型，給小鼠分別進(jìn)行預(yù)防和治療性接種BCG，觀察BCG對(duì)哮喘小鼠T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子T-bet蛋白與GATA-3蛋白

3、表達(dá)的影響并比較預(yù)防和治療性接種的差異，探討其可能的機(jī)制。 方法：32只雄性昆明小鼠隨機(jī)分成正常對(duì)照組（A組），哮喘模型組（B組），BCG預(yù)防組（C組），BCG治療組（D組）。通過(guò)卵清蛋白致敏建立哮喘模型。觀察4組小鼠的一般情況；肺泡灌洗液的細(xì)胞分類；肺組織的病理切片；用免疫組化半定量分析法檢測(cè)肺組織中T-bet和GATA-3蛋白的表達(dá)。 結(jié)果： 1.BALF檢查顯示： 哮喘組（B組）與對(duì)照組（A組）比較

4、，BALF中白細(xì)胞總數(shù)及嗜酸性粒細(xì)胞比例均明顯升高（P<0.01）。BCG接種各組與哮喘組（B組）比較均能明顯降低BALF中白細(xì)胞總數(shù)及嗜酸性粒細(xì)胞比例（P<0.01），接種兩組之間無(wú)顯著差異（P>0.05）。 2.病理檢查顯示： 病理學(xué)HE染色發(fā)現(xiàn)：對(duì)照組（A組）小鼠肺內(nèi)幾乎無(wú)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；而哮喘組（B組）小鼠肺內(nèi)可見(jiàn)大量炎性細(xì)胞和浸潤(rùn)，其炎性細(xì)胞浸潤(rùn)程度與對(duì)照組（A組）比較明顯增加（P<0.01）。BCG接種后，炎性

5、細(xì)胞浸潤(rùn)程度較哮喘組（B組）明顯降低（P<0.01），但仍然比對(duì)照組（A組）嚴(yán)重（P<0.01）。 3.免疫組化結(jié)果顯示： 哮喘組（B組），卡介苗預(yù)防組（C組），卡介苗治療組（D組）的T-bet表達(dá)量顯著低于對(duì)照組（A組），其差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均<0.01）；卡介苗預(yù)防組（C組），卡介苗治療組（D組）的T-bet表達(dá)量與哮喘組（B組）比較明顯增多，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均<0.01）?？ń槊缃臃N兩組之間的比較差異無(wú)統(tǒng)

6、計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。哮喘組（B組），卡介苗預(yù)防組（C組），卡介苗治療組（D組）的GATA-3表達(dá)量顯著高于對(duì)照組（A組），其差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均<0.01）；卡介苗預(yù)防組（C組），卡介苗治療組（D組）的GATA-3表達(dá)量與哮喘組（B組）比較明顯減少，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均<0.01）；卡介苗接種兩組之間的比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。 4.相關(guān)分析顯示： 哮喘組（B組）小鼠轉(zhuǎn)錄因子T-bet蛋白表達(dá)量

7、與氣道炎癥呈顯著負(fù)相關(guān)（r=-0.954 P<0.01），與肺泡灌洗液中嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)百分比呈顯著負(fù)相關(guān)（r=-0.900 P<0.01）；哮喘組（B組）小鼠轉(zhuǎn)錄因子GATA-3蛋白表達(dá)量與氣道炎癥呈顯著正相關(guān)（r=0.954 P<0.01），與肺泡灌洗液中嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)百分呈顯著正相關(guān)（r=0.811 P<0.05）；哮喘組（B組）小鼠轉(zhuǎn)錄因子T-bet蛋白表達(dá)量與轉(zhuǎn)錄因子GATA-3蛋白表達(dá)量呈顯著負(fù)相關(guān)（r=-0.981，P<0.

8、01）。 結(jié)論：1.通過(guò)OVA致敏激發(fā)成功的造成了哮喘的小鼠模型，在支氣管哮喘模型中，轉(zhuǎn)錄因子T-bet和GATA-3失衡表達(dá)，表現(xiàn)為T(mén)-bet低表達(dá)，GATA-3高表達(dá)，T-bet表達(dá)量與GATA-3表達(dá)量呈負(fù)相關(guān)。T-bet和GATA-3蛋白表達(dá)量分別與氣道炎癥呈直線相關(guān)，T-bet和GATA-3的失衡表達(dá)很可能是哮喘氣道炎癥形成的重要原因之一。2.BCG不僅能夠增加轉(zhuǎn)錄因子T-bet蛋白的表達(dá)，同時(shí)能夠抑制轉(zhuǎn)錄因子GATA