急性高血糖對(duì)大鼠腦出血后神經(jīng)損傷的影響.pdf

1、背景與目的:
　　腦出血（intracerebral hemorrhage，ICH）是神經(jīng)系統(tǒng)的常見疾病，占急性腦血管病的10％-15％，死亡率與致殘率極高。腦出血后除血腫的占位效應(yīng)導(dǎo)致原發(fā)性損傷外，繼發(fā)性損傷如血腫周圍腦組織發(fā)生一系列病理變化也是導(dǎo)致腦出血患者神經(jīng)損傷加重、預(yù)后不良的重要因素。近年來發(fā)現(xiàn)許多腦出血(ICH)患者入院時(shí)存在高血糖且預(yù)后不良，本實(shí)驗(yàn)建立伴有急性高血糖狀態(tài)的大鼠腦出血模型來研究急性高血糖對(duì)大鼠腦出血后神

2、經(jīng)損傷的影響。
　　長期以來自噬被認(rèn)為是細(xì)胞的一種重要分解代謝途徑，可清除細(xì)胞內(nèi)衰老細(xì)胞器和錯(cuò)誤折疊蛋白，在缺氧缺血等應(yīng)激狀態(tài)下有助于維持細(xì)胞能量穩(wěn)態(tài)、促進(jìn)細(xì)胞存活。近年來研究發(fā)現(xiàn)自噬參與多種疾病的病理生理過程，ICH后自噬也激活，但自噬激活后究竟是加重ICH后神經(jīng)損傷還是作為神經(jīng)功能保護(hù)機(jī)制至今仍未明確。細(xì)胞自噬水平與細(xì)胞本身生理病理狀態(tài)及周圍環(huán)境等密切相關(guān)，微管相關(guān)蛋白輕鏈3(LC3)和Beclin-1是兩個(gè)經(jīng)典的自噬標(biāo)記物，

3、本實(shí)驗(yàn)通過檢測血腫周圍細(xì)胞LC3和Beclin-1水平來觀察自噬變化并研究ICH后高糖對(duì)自噬的影響。
　　方法:
　　成年SD雄性大鼠隨機(jī)分成四組，即正常對(duì)照組（C組）、高血糖組（G組）、腦出血組（I組）、伴急性高血糖的腦出血組（IG組）。大鼠右側(cè)尾狀核注射股動(dòng)脈自體血建立腦出血?jiǎng)游飳?shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停↖組），注血前30分鐘腹腔注射50％葡萄糖溶液(6ml/kg)建立伴有急性高血糖的大鼠腦出血模型（IG組）。觀察術(shù)前及術(shù)后24小時(shí)神經(jīng)

4、功能缺失癥狀（轉(zhuǎn)角試驗(yàn)及前肢運(yùn)動(dòng)不對(duì)稱試驗(yàn)）并評(píng)分、術(shù)后24小時(shí)血腫大小、腦組織含水量及腦組織HE染色切片，評(píng)估ICH后神經(jīng)損傷程度;免疫組化及免疫印跡技術(shù)(Western blot，WB)檢測術(shù)后24小時(shí)血腫周圍腦組織Beclin-1和LC3蛋白，評(píng)估血腫周圍細(xì)胞自噬水平變化。
　　結(jié)果:
　　1.腦出血24小時(shí)后轉(zhuǎn)角試驗(yàn)及前肢運(yùn)動(dòng)不對(duì)稱試驗(yàn)評(píng)分均升高(P＜0.01)，血腫周圍腦組織含水量升高(P＜0.05)，組織切片HE

5、染色可見血腫周圍組織水腫明顯，細(xì)胞分布不均勻，神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)量明顯減少，中性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞浸潤。
　　2.腦出血24小時(shí)后腦組織LC3和Beclin-1蛋白免疫組化染色血腫周圍可見陽性細(xì)胞，較正常對(duì)照組染色深，WB結(jié)果可見血腫周圍組織LC3和Beclin-1蛋白水平升高。
　　3.無ICH的單純高血糖不影響大鼠神經(jīng)功能缺失癥狀評(píng)分及腦含水量，但與血糖正常的腦出血組相比，急性高血糖可使腦出血24小時(shí)后前肢運(yùn)動(dòng)不對(duì)稱試驗(yàn)評(píng)分升高

6、(P＜0.01)，血腫周圍腦組織含水量升高(P＜0.01)。
　　4.無ICH的單純高血糖不影響大鼠腦右側(cè)基底節(jié)LC3和Beclin-1蛋白水平，但與血糖正常的腦出血組相比，急性高血糖使腦出血24小時(shí)后血腫周圍LC3和Beclin-1陽性細(xì)胞染色變淺，并降低血腫周圍組織LC3和Beclin-1水平。
　　結(jié)論:
　　1.大鼠腦出血后出現(xiàn)明顯神經(jīng)功能缺失癥狀和腦水腫，血腫周圍組織自噬水平升高。
　　2.急性高血糖可