自制組織芯片研究Twist、P53及MDM2在子宮頸鱗癌、CIN中的意義.pdf

1、目的：子宮頸鱗癌是最常見的女性惡性腫瘤，占女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的半數(shù)以上；它嚴(yán)重威脅著婦女的健康和生命。針對子宮頸鱗癌的發(fā)生機制，國內(nèi)外學(xué)者的研究方興未艾。從蛋白水平研究子宮頸鱗癌發(fā)病機制，對子宮頸鱗癌的臨床診斷、鑒別診斷及指導(dǎo)臨床治療，具有十分重要的意義。
　　 Twist是存在于果蠅、鼠、人等生物體內(nèi)的一種堿性螺旋-環(huán)-螺旋（Basic helix-loop-helix，bHLH）轉(zhuǎn)錄因子，主要表達(dá)于胎盤、胚胎中胚層和成人的

2、某些中胚層來源的未分化組織。Twist屬于高度保守的轉(zhuǎn)錄因子，是上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)變過程中的關(guān)鍵調(diào)控因子，對腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移有重要影響。人Twist基因位于7p21.2，含有2個外顯子和1個內(nèi)含子。Twist參與了某些上皮來源的腫瘤細(xì)胞發(fā)生上皮-間質(zhì)分化（epithelial-mesenchymal transition，EMT），并促進(jìn)其侵襲轉(zhuǎn)移。
　　 p53基因是一種細(xì)胞周期的負(fù)調(diào)節(jié)因子，突變使其喪失正常功能，可導(dǎo)致腫瘤的形成。

3、p53基因在細(xì)胞生長期作為一種轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子具有重要的調(diào)節(jié)作用。Twist能夠與p53啟動子上的重要反式激活子HOXA5相互作用，并調(diào)節(jié)其活性。Twist還通過減少p53的上游調(diào)控子p14ARF的表達(dá)而影響p53的穩(wěn)定，并且能夠阻止p53翻譯后修飾，如絲氨酸的磷酸化，而這種修飾作用對p53的激活是不可缺少的。
　　 MDM2是從一個含有雙微體（murine double minute，MDM）自發(fā)轉(zhuǎn)化的 BALB/3T3DM細(xì)胞中

4、克隆出來的，它是一個高度擴增的、進(jìn)化上比較保守的癌基因，能自發(fā)地導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。MDM2基因的擴增可導(dǎo)致p53基因失活。在調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂、增殖方面，p53和MDM2之間存在相互調(diào)控作用。
　　 本課題采用組織芯片技術(shù)及免疫組化方法檢測 Twist、p53和MDM2三種相關(guān)基因在宮頸不同程度病變中的表達(dá)情況，分析Twist、p53和MDM2的異常表達(dá)在子宮頸鱗癌的發(fā)生、發(fā)展中的相互關(guān)系，探討Twist、p53、MDM2與子宮頸鱗癌臨床

5、指標(biāo)之間的相互關(guān)系。這對于了解子宮頸鱗癌的發(fā)病機制，提高子宮頸鱗癌的診斷準(zhǔn)確率有重要意義。
　　 方法：
　　 1、收集河北省人民醫(yī)院病理科2007年8月～2008年8月宮頸組織共168例，其中子宮頸浸潤性鱗癌44例，CIN組織96例（CINⅠ，34例；CINⅡ，30例；CINⅢ，32例），正常宮頸組織28例。
　　 2、應(yīng)用組織芯片技術(shù)及免疫組織化學(xué)方法（SP法）檢測子宮頸鱗癌、CIN組織及正常子宮頸鱗狀上皮組

6、織中Twist、p53及MDM2蛋白的表達(dá)。
　　 3、采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，以α=0.05為檢驗水準(zhǔn)。
　　 結(jié)果：
　　 1、組織芯片結(jié)果
　　 按課題需要共制作芯片5張，（6×5，1張；7×5，4張），有3個位點缺失，14個位點組織無意義，其他位點均可見足夠的組織結(jié)構(gòu)。最終樣本共151例，其中子宮頸鱗癌組40例，CIN組85例（CINⅠ，30例；CINⅡ，26例；CINⅢ，29

7、例），正常宮頸組織26例，組織位點的形態(tài)可觀測率在89.88％。
　　 HE染色均勻，無脫片、異位和皺折，顯示組織著色良好。免疫組織化學(xué)染色，陽性定位清楚，背景干凈，無掉片現(xiàn)象。
　　 2、Twist在子宮頸上皮不同病變中的表達(dá)
　　 在CIN和子宮頸鱗癌病例中，無論是基底層還是其他病變各層均可見細(xì)胞質(zhì)/核強陽性表達(dá)，子宮頸鱗癌（50.0％）及CINⅢ（48.3％）、CINⅡ（42.3％）、CINⅠ（10.0％）

8、均明顯高于正常宮頸鱗狀上皮（0％）中Twist的表達(dá)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；Twist表達(dá)在子宮頸鱗癌中明顯高于CINⅠ（P<0.05）；子宮頸鱗癌和CINⅢ、CINⅡ之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。CINⅢ、CINⅡ與CINⅠ之間Twist的表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　 3、p53在子宮頸上皮不同病變中的表達(dá)
　　 在正常宮頸鱗狀上皮中，p53不表達(dá)，從正常子宮頸鱗狀上皮（0％）、C

9、INⅠ（10.0％）、CINⅡ（46.2％）、CINⅢ（51.7％）到子宮頸鱗癌（52.5％），p53表達(dá)陽性細(xì)胞逐漸增多。p53在子宮頸鱗癌及CINⅢ、CINⅡ中均高于正常子宮頸鱗狀上皮中的表達(dá)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；p53在CINⅠ中的表達(dá)與子宮頸鱗癌、CINⅢ、CINⅡ差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），但子宮頸鱗癌與CINⅢ、CINⅡ之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
　　 4、MDM2在子宮頸上皮不同

10、病變中的表達(dá)
　　 在子宮頸鱗癌中MDM2強陽性表達(dá)（60％），明顯高于正常子宮頸組織（0％）；CINⅠ（26.7％）、CINⅡ（50％）、CINⅢ（56.7％）明顯高于正常子宮頸組織（0％），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。子宮頸鱗癌、CINⅢ、CINⅡ與CINⅠ之間MDM2陽性率差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。但在子宮頸鱗癌和CINⅢ、CINⅡ之間MDM2表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
　　 5、子宮

11、頸鱗癌中Twist、p53、MDM2之間的相關(guān)性分析
　　 在子宮頸鱗癌中Twist與p53表達(dá)具有顯著正相關(guān)性（P<0.05，r=0.683）；Twist與MDM2表達(dá)具有顯著正相關(guān)性（P<0.05，r=0.363）；p53與MDM2表達(dá)具有顯著正相關(guān)性（P<0.05，r=0.454）。
　　 6、子宮頸鱗癌中Twist、p53蛋白、MDM2表達(dá)與年齡、腫瘤大小、分化程度、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及病理分級之間的關(guān)系<

12、br>　　 Twist、p53、MDM2與臨床分期、年齡、腫瘤大小、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及病理分級之間均無明顯相關(guān)性（P>0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1 CIN組及子宮頸鱗癌中Twist、p53及MDM2表達(dá)均明顯高于正常子宮頸鱗狀上皮，提示Twist、p53及MDM2可以輔助診斷子宮頸上皮是否存在CIN及鱗癌病變。
　　 2 CINⅡ、CINⅢ組及子宮頸鱗癌中Twist、p53及MDM2的表達(dá)均明顯